Earticle

본 연구에서는 친수성기질과 소수성기질을 함께 수용하는 수용성 상용용매를 사용하여 반응매질의 친수성과 소수성이 알킬글루코시드의 합성반응에 적 합하도록 조절된 양친매질을 개발하고 hydrophili C city control이 이루어진 효소반응기술을 이용하여 효소의 활성도와 안정성, 기질의 가용화, 얄킬글루코 시드의 수율과 농도의 관점에셔 가장 바람직한 양친 매상 효소반응공정 (amphiphilic phase enzyme re action process)을 제시하였으며, 핵실글루코시드, 옥틸글루코시드, 데실글루코시드 및 도데실글루코시 드를 합성한 결과 생생물 농도는 각각 18.2, 9.68, 7.27, 6.03g/L을 얻였다.

An amphiphilic phase enzyme reaction was used to synthesize alkyl glucosides from glucose and alkyl alcohol with immobilized B-glucosidase using four glycol ether cosolvents(monoglyme, diglyme, 2-methoxyethanol, and 1,4-dioxane). Monoglyme was shown to be the best cosolvent for the amphiphilic phase medium composed of water/cosolvent/alkyl alcohol admixture. To obtain high yield of alkyl glucoside by amphiphilic phase enzyme reaction, hydrophilicity-hydrophobicity of amphiphilic media and enzyme microenvironment was optimized from the viewpoints of substrate solubility, enzyme activity, water activity, and dynamic equilibrium between glucose alcoholysis and glucoside hydrolysis. Under optimum reaction conditions, the highest concentrations of hexyl, octyl, decyl, and dodecyl glucosides were 18.2, 9.68, 7.27, and 6.03g/L, respectively.

효소 purine nucleoside phosphoryrase(NP)하 고 xanthine oxidase(XOD) 두 효소를 하나로 고정화시켜 산소 전극으로부터 ATPase 활성 계측용 바 이오 센서를 개발했다. 개발된 ATPase센서를 이용 해서 Thunnus albacares(Yeliowfin tuna), Tetra~ t turus audax(Striped marlin), Prognichthys agoo (Japanese flyingfish) 그리고 Cyprinus carpio ( ( Carp) 등의 각 4종의 어근육 단백질중의 K+-,Ca2+-[?][?][?][?][?][?][?][?][?]Mg2+-ATPase 활성을 측정하였고, 시료 1 개를 측정는데 3분의 시간을 필요로 하였다. K+-,Ca2+-ATPase 활성의 경우 본 연구에셔 개발한 센 셔를 이용한 측정 결과와 종래(비색측정)법으로 측 정한 결과와의 사이에서 좋은 상관치를 얻었다.

The sensor to determine ATPase activities was consisted of an immobilized enzyme membrane(purine nucloside phosphoryrase and xanthine oxidase) and an oxygen electrode. The proposed sensor was used for the determination of K+-,Ca2+-andMg2+-ATPase activities in several fish muscle proteins such as Thunnus albacares(Yellowfin tuna), Tetrapturus audax(Striped marlin), Prognichthys agoo(Japanese flyingfish), and Cypvinus carpio(Carp). K+-,Ca2- ATPase activities measured by the proposed sensor system were in good agreement with the results obtained by a conventional colorimetric assay. One cycle of assay could be completed within 3mlnutes.

과립활성탄(GAC)상에 고정된 세균에 의한 4chloro-2-methylphenoxyacetic acid (MCPA)의 분해가 유통 조건하의 컬럼반응조에서 연구되었다. GAC상에 생물막을 형성시키기 위한 접종으로서 M MCPA를 분해하는 세균의 혼합배양이 사용되었다. 접종하기 전에 GAC에 의한 MCPA의 흡착을 조사 하였으며 접종후 GAC상에 형성된 생물막을 주사전자 현미경으로 관찰하였다. MCPA 분해는 생물막이 형성된 GAC를 포함하는 컬럼반응조의 회분 및 연 속운전 조건하에서 조사되었다. 회분배양에서 MC P PA의 완전분해가 이루어졌다. 연속배양상태에서 분적 인 MCPA의 분해가 일어났으나 분해정도는 기질인 MCPA의 결럼반응조내로 유입속도에 의존 었다.

Bacterial degradation of 4-chloro-2-methylphenoxyacetic acid (MCPA) was studied in column reactors under conditions approximating a fluidized bed system, with granular activated carbon (GAC) as a support matrix. A mixed bacterial culture of MCPA-degrading bacteria was used as an inoculum to develop a biofilm on GAC. Initially, adsorption of MCPA by GAC and blofilm formation on GAC were examined. MCPA degradation was evaluated with a batch and continuous mode of operation of the GAC fixed-film column reactors. In the batch operations, complete degradation of MCPA was achieved during the incubation period. Partial degradation of MCPA occurred in the continuous operations and MCPA degradation was dependent on the feeding rate of MCPA solution.

효소적으로 합성된 메틸프룩토시드(methyl fruc­t to side )와 당의 혼합물로부터 Amberlite IRA -900 을 고정상 담체로 하여 당과 배당체를 액체 크로마 토그래피법으로 정밀 분리함으로써 메틸프룩토시드 를 출발물질로 하는 새로운 sugar ester의 합성 공 정이 연구개발되도록 하고, 액체 크로마토그래피법 에 의한 알킬배당체의 정밀 분리기술이 실용화될 수 있도록 최적조업조건과 해상도 빛 생산성을 검토하였다. Amberlite IRA-900을 고정상 담체로 한 메틸프 룩토시드의 정밀분리공정은 이론단수의 개념에 근거 한 선형 크로마토그래피 모델로 모사할 수 있었으며 에틸프룩토시드와 자당의 용출 크로마토그램을 잘 예측할 수 있었다. 급액농도가 각각 3g/L와 5g/L 인 메틸프룩토시드와 자당의 수용액으로부터 메틸프 룩토시드를 정밀분리하기 위해서는 급액을 60℃에서 충전체적의 75%까지 주입하고공탑유속 1.13cm/mm의 중류수로 용출시킬 때 해상도 1.1에서 95% 이상의 회수율과 7mg MF/g-resin/h의 생산성을 얻었다

Methyl frucloside was purified from the aqueous sugar/methyl fructoside solution by liquid chromatography using Amberlite IRA-900, strong anion-exchange resin. The optimum operating conditions, resolution and productivity of methyl fructoside were discussed to evaluate the practical feasibility of the proposed chromatographic separation process of methyl fructoside which is useful as a new starting material for sugar ester synthesis. The linear chromatography model with HETP was well applied to the chromatographic separation process of methyl fructoside and the theoretical solution successfully predicted the elution chromatogram of methyl fructoside and sucrose at different superficial linear velocity of eluent for rectangular feed with different loading volume of packed bed. The optimum operating conditions were found to be 75% with the loading volume of packed bed at 1.13 cm/min of the superficial linear velocity at 60℃, and gave the productivity of methyl fructoside of 7 mg/g-resin/h with the resolution of 1.1.

충치 예방 물질의 탐색 연구 일환으로, Cacao bean husk(CBH) 추출물로부터 얻어진, gluco-syltransferase(Gtase) 저해 활성 분획을 분리하였 다. 이를 다시 MCI-gel CHP-20와 Sephadex LH 20의 column chromatography법으로 분리, 정제하였으며, 이로부터 얻어진 2개의 GTase 활성 저해 물질에 대한 구조 해석을 행하였다. 분리.정제된 2개의 GTase 저해 활성 물질은 anisaldehyde-H2SO4 및 FeCb에서 각각 갈색 및 청색 반응을 하며, 또 TLC상에서 dimer의 flavan-3-ol Rr값을 나타내는 단일 물질이었다. NMR(PMR, C CMR) 빛 mass spectrum으로 두 정제 분획에 대 한 화학 구조를 분석한 결과, G Tase 저해능을 나타 내는 단물질은 (-)-epicatechin-(B→8)-catechin 으로 결합된 procyanidin B-1 (C30H26O12) 및 cate chin의 2량체인 procyanidin B一3(C30H26O12)이었다.

The isolation of active compounds showing the inhibitory effect on glucosyltransferase(GTase) from cacao bean husk(CBH) extract was carried out for screening of anti-plaque agents. These active compounds were purified by additional column chromatography of MCI-gel CHP-20 and Sephadex LH-20 and their chemical structures were determined by NMR and mass spectroscopy. Two compounds showing the inhibitory effect on GTase from CBH extract were obtained. These compounds showed positive reactions with anisaldehyde-H2SO4 solution and FeCl3, and were identified as dimeric flavan-3-ols on TLC. By NMR and MS data analyses, the structures of two different flavan-3-ols were identified as procyanidin B-1 and procyanidin B-3, respectively.

고농도 카드뮴이 함유된 배지에셔 금속 결합 단백 질인 metallothioneion 유전자로 형질전환된 재조합 S. cerevtswe BZ-pJ의 생육과 카드뮴 흡착에 미치는 영향을 살펴보았다. 카드뮴 농도가 높아짐에 따라 재조합 효모의 lag phase가 비례적으로 길어졌으며 성장은 전반적으로 느려졌고 건조균체농도도 감소하는 경향을 보였다. 카드융 220 mg/L인 배지에서 카드뮴 제거 효율이 58.6%로서 최고치를 보였다. 카드뮴 배지에 구리가 10 mg/L의 구리가 첨가 될 경우 첨가되지 않은 경우보다 재조합 효모의 spe cific cadmium uptake는 더 높아졌고, lag phase 가 2 내지 4일 정도 더 짧아졌다. 10 mg/L의 구리가 첨가된 카드뮴 630 mg/L 배지에서 자란 재조합 효모는 52.6 mg Cd2+/g dry cell을 축적하였다. 카드뮴 680 mg/L 배지에 구리의 첨가량이 11에서 33 mg/L로 증가됨 에 따라 specific cadmium up­t take가 17.0에서 42.0 mg Cd2+/L dry cell로 증가하였다. 건조균체농도, specific cadmium uptake rate, 카드뮴 제거 효율 등이 전반적으로 향상되였다. 카드융 100 mg/L에서 척응한 재조합 효모가 본배양 배지로 옮겨질 때 최단기간의 lag phase를 보였지만 가장 낮은 비성장속도를 나타내였다.

Recombinant Saccharomyces cerevisiae BZ-pJ containing the gene coding for metallothionein, a metalbinding protein was grown in the medium with high cadmium concentrations to study the characteristics of growth and cadmium uptake. High concentrations of cadmium reduced cell growth and final cell density and increased the lag phase periods of the recombinant yeast. Addition of 10 mg Cd2+/L to the growth medium remarkably decreased a lag period and enhanced the specific cadmium uptake to 52.6 mg Cd2+/g dry cell. The effect of copper addition was further investigated in the medium of 680 mg Cd2+/L. An increase in copper concentration from 11.0 to 33.3 mg/L enhanced the specific cadmium uptake from 17.0 to 42.0 mg Cd2+/g dry cell.

Acetobacter xylinum A TCC 23769에 의한 미생물 생룰로오스의 생산을 위한 최적배지가 개발되었다. 미생물생룰로오스의 생산을 위한 각 영양성분의 최 척농도는 리터당 10 g peptone, 20 g yeast extract, 5g glucose, 1.56 g NaHPO4, 1.8 gKH2PO4, 0.05 g MaSO4, 0.002g FeCI3, 5 g citric acid 그리고 10 mL ethanol로 결정되었다. 개발된 배지에서 수득한 생룰로오스의 생산성은 구연산과 에탄융의 상승효과 로 정치배양시 보고된 결과보다 매우 높은 포도당 단위그람당 0.446 그람이었다. 개발된 배지에서 정치배양시 세포성장 빛 셀룰로오스의 생산 또한 조사 되었다

A complex medium was developed for the production of microbial cellulose by Acetobacter xylinum ATCC 23769. The optimum concentration of each nutrient for the production of microbial cellulose was determined to be 10g peptone, 20g yeast extract, 5g glucose, 1.56g Na2HPO4, 1.8g KH2PO4, 0.05g MgSO4, 0.002g FeCl3, 5g citric acid and 10 mL ethanol per liter. With synergistic effects of citric acid and ethanol, cellulose productivity achieved in developed medium was 0.446 gram of cellulose per gram glucose for static culture, which is much higher than reported values. Cell growth and the cellulose production in the developed medium under static culture was also investigated.

Contact lens 재료물질로 사용되어지는 poly(2 h hydroxyethylmethacrylate), poly (HEMA) 는 물을 약 45퍼센트 포함하여 수화젤(hydrogel)을 만들 수 있는 고분자 물질이다. Poly(HEMA)와 단백질의 구성물질인 수용성 아미노산(alanine, argmme, glycine, lysine, methionine, proline, serine)과의 상호작용력과 작용위치에 대한 실험을 FT - IR과 R Raman 분광법을 사용하여 행한 결과 Arg과 Lys 이 가장 크게 작용하였고, 작용크기는 각 pH에 따라 존재하는 이온종과 양에 관계되며, 작용위치는 주로 poly(HEMA) 내에 존재하는 히드록시기에서 일어났다.

The interaction between poly(2-hydroxyethylmethacrylate)(poly(HEMA)) which is a material of contact lens containing approximately 45%o water and water soluble amino acids (alanine, arginine, glycine, lysine, methionine, proline, and serine) was investigated by using FT-IR and Raman spectroscopy. The results revealed that arginine and lysine had the strongest interaction with poly(HEMA) among amino acids. The interaction depended on the quantity of charges on ammo acids. They interacted predominately with hydroxyl groups in poly(HEMA).

Aspergillus oryzae A Tee 2114를 사용하여 B-mannanase의 생산에 영향을 주는 배지성분의 최적 화를 수행하였다. 탄소원인 locust bean gum의 농 도를 달리하여 발효를 수행하였다. Locust bean gum의 농도가 20 g/L 이상일 때는 초기의 점도가 높아 혼합이 거의 되지 않아 초기에 B-mannanase 의 생산이 지 연되는 현상이 나타났고. Locust bean g gum의 농도가 증가할수록 B-mannanase의 역가와 균체농도가 비례척으로 증가하였다. Locust bean gum 10 g/L 배지에서 여러 가지 질소원이 B-mann anase의 생산에 미치는 영향을 살펴 본 결과,B-man n nanase의 역가는 무기질소원 중에서는 (NH-4)2SO4가 좋았으며 유기질소원 중에서는 malt extract가 가장 좋았다. 여러 가지 무기엽의 최적화를 수행한 결과 KH,PO.가 B-mannanase의 생산에 중요한 인자임을 알 수 있었다. 배지최적화 결과 최적배지 로 locust bean gum 10 giLt malt extract 3 g/L, (NH-4)2SO42g/L1KH2PO4 10 g/L이 결정되었으며 이때 Bmannanase의 역가는 거의 6 unit/mL에 접 근하였다. 최적배지를 사용하여 발효조에서 배양을 수행하였다. 발효조의 흔합효과로 배양초기에 나타 나는 B-mannanase 생산 지 연현상을 감소시 킬 수 있었고 배양시간도 단축할 수 있었다. 27시간 배양 한 후 Bmannanase의 역가 9.7 unit/mL와 비 B-mannanase의 역가 1.9 unit/mg-cell-을- 얻었다. 이 때, 생산성은 0.36 unit/mL. h이었다.

Medium optimization for B-mannanase production by Aspergillus oryzae ATCC 2114 was performed. Effect of carbon source (locust bean gum) concentration on B-mannanase production was investigated. Above 20 g/L locust bean gum, a lag time for B-mannanase production was appeared because high concentration of locust bean gum caused high viscosity which made the mixing of medium poor. As the locust bean gum concentration in the medium increased, B-mannanase activity and cell growth increased proportionally. Effect of various nitrogen sources on B-mannanase production was also studied. (NH4)2SO4 and malt extract were the most effective for B-mannanase production among the inorganic nitrogenous compounds and organic nitrogen nutrients. Inorganic compounds such as KH2SO4, NaCl, Na2CO3, and MgSO4, on B-mannanase production were optimized for B-mannanase production. Locust bean gum of 10 g/L, malt extract of 3 g/L, (NH4)2SO4 of 2 g/L, KH2SO4, of 10 g/L were selected as the optimal medium. Culture in a fermentor by using the optimal medium was carried out. Lag time of B-mannanase production was shorter due to the better mixing of the fermentor. The maximum B- mannanase activity of 9.7 unit/mL and specific B-mannanase activity of 1.9 unit/mg-cell could be obtained at 27 hours and the productivity of B-mannanase was 0.36 unit/mLh.

Conditions for the culture of Pleurotus spp. mycelium using rancid frying oils were investigated. Among the six strains tested, Pleurotus ostreatus CBS 03 showed the greatest mycelial growth on fish paste and ramyon frying oil, and was used in this study. The optimum temperature and pH for mycelial growth were from 25 to 30℃ and pH 5.5 to 6.0, respectively. Tryptone for mycelial growth was better than any other nitrogen sources. The addition of KH2PO4andMgSO4 enhanced mycelial growth at 0.2 and 0.01% on fish frying oil, and at 0.1 and 0.03% on ramyon frying oil. Among the vitamins used, thiamine and nicotinic acid were the most effective ones.

본 연구에서는 페놀 분해 능력이 있는 활성슬러지 를 광경화성 수지에 포괄 고정화하여 페놀 분해에 미치는 영향인자에 대하여 조사 검토하였다. 고정화 활성슬러지의 경우 free 활성슬러지 보다 넓은 pH 범위에서 페놀 분해 상대활성도가 높게 나 타났￡며, 고정화비드 직경이 작을수록 페놀분해 시 간이 짧았다. 페놀농도 2000 mg/L까지는 free 활 성슬러지의 분해시간이 짧았으나, 3000 mg/L에서 는 고정화 활성슬러지의 분해능이 높았다. 고정화비 드 주입량에 따른 페놀 분해성은 반융기 내에 주입 된 고정화비드양에 정비례 하지는 않았으나 주입량 이 많을수록 페놀 처리율이 높았다. 고정화 활성슬 러지의 반융에서는 반복샤용 7회 이상일 때의 상대 활성도는 처음의 약 8배 정도 증가하였다. 고정화 활성슬러지를 합성폐수 또는 증류수에서 진탕 또는 정지상태로 20일간 보관한 후에는 700 mg/L의 페놀이 24시간 후면 거의 분해되었으며, 증 류수에 정지된 상태로, 40일간 보관한 후에는 마찬가지로 24시간 후에 96.7 % 이상이 분해되었다. 또 한 고정화 활성슬러지를 합성폐수에서 호기적으로 보존하면 80일간 보존이 가능하였다. 고정화 활성슬러지를 사용한 연속처리에서는 용적 부하 5.59 kg-phenol/m3.d에서 95 % 이상의 페놀 이 제거되었으며, 연속실험에서 페놀제거 효율이 95 % 이상일 때 처리성척을 비교해보면, 고정화 활성 슬러지 빛 free 활성슬러지 용척부하는 각각 7.46, 3 3.72 kg-phenol/m3.day로써 고정화 활성슬러지가 2배 더 높은 부하에서 처리가 가능하였다

Effects of various factors on the phenol degradation by activated sludge immobilized with the photo-crosslinked resin were investigated. The optimum pH on the degradation of phenol in both free and immobilized activated sludge was 7. When the pH of the reaction was varied from 5 to 10, the relative activity of the phenol degradation by the immobilized activated sludge was higher than that by the free activated sludge. A higher rate of phenol degradation was observed when a bead size was smaller. The phenol degradation in the free activated sludge was inhibited at the 3000 mg/L of phenol, while that in the immobilized activated sludge was maintained at the same concentration for 28 hrs without an inhibition. The degradation rates of phenol were not directly proportional to the increasing amount of immobilized beads dosage, but the phenol degradation was made in a rather short time than that for a free sludge system. The relative activities of the immobilized activated sludge after 7 runs of repeated reactions increased about 8 times as that of the first reaction. The activities for the phenol degradation remained stable for at least 80 days when the immobilized activated sludge was stored at an aerobic condition in the wastewater containing phenol. The loading rate as high as 5.59 kg-pheno1/㎥.d could have been achieved during the continuous treatment of phenol by the immobilized activated sludge.

본 연구에서는 단일 탄소원인 포도당으로부터 P PHA를 생산하는 콩시균 Pseudomonas sp. HJ를 보다 정확하게 동정하기 위하여 수치분류를 실시하 였으며, 또한 보조기질을 첨가하였을때의 PHB/HV 합성 양상을 검토하였다. Pseudomonas sp. HJ는 각 대조균주들중에서 Pseudomonas picketti와 가장 유 사도가 높은 것으로 나타났다(78.8%). 그러나 수치 분류에 서 통일 균종에 포함될 수 있는 유샤도는 85 % 정도인 것으로 얄려져 있으므로, 본 공시균 P Pseudomonas sp. HJ는 Pseudomonas 속의 다른 종 (species)이거나 새로운 종(species)일 가능성이 높 았다. 보조기 질로 hexadecane과 propionic acid를 각각 0.4%씩 첨가했을 경우, 농도증가에 비례하여 H HV 함량은 점차 증가하여 각각 60.8 mol%, 44.9 mol%까지 축적되었다. PHB/HV내의 HV 함량은 p propionic acid냐 hexadecane의 농도를 달리하여 첨가함으로써 조절할 수 있었다. 보조기질로 propl- onic acid 0.2 %를 대수기 중기 인 배양 18시간에 첨 가하였을때 균체 생육이 가장 우수하였으나, HV monomer의 비율은 대수기 말기인 배양 24시간대에 첨가하였을때 49.6 mol%로 가장 높았다.

Poly(3-hydroxybutyric-co-3-hydroxyvaleric) acid(PHB/HV) copolymer synthesis by Pseudomonas sp. HJ from glucose and cosubstrate was investigated. Taxonomic analysis suggested that Pseudomonas sp. HJ was best marched to Pseudomonas picketti having 78.8% similarity. Pseudomonas sp. HJ produced PHB/HV copolymer containing 60.8 mol% HV and 44.9 mol% HV when supplied with hexadecane and propionic acid as a cosubstrate, respectively. The HV composition in PHB/HV copolymer was controlled by varying the concentration of hexadecane and propionic acid. Propionic acid added after 24 hours of incubation was incorporated as the HV monomer in the PHB/HV copolymer up to 49.6 mol%.

군부에서 분리한 한천 분해 균주의 최적 효소 생산 조건은 질소원으로 nutrient broth, yeast extract를 각각 0.3%, 0.2%였고, 탄소원으로는 agar 0.5%가 가장 적절한 조건이었다. NaCI 농도는 2.0 % %, pH 7.0, 온도는 30±2℃, 의 조건에서 약 96시간 배양하는 것이 가장 적절한 효소 생산 조건이었다. 분리균주의 생리, 생화학 특성을 조사한 결과, 그랑 음성 간균으로 gold-yellow colony를 형성하는 균 으로 oxidase, catalase 생성의 호기성균이었다. 각종 유기산류, 아미노산류 및 당류의 이용성 시험에 서 citrate, lactate, salicine, histidine, glucose, melibiose, sucrose에 대해 양성을 나타내었고, chitin, casein, gelatin을 분해하고, indole 및 H2S 를 생성하지 않았다. 이상의 결과로부터 본 균주는 Cytophaga sp.로 동정되었다.

The strain which produces agar degrading enzyme was isolated from chiton(Liolophura japonica). The strain was identified as Cytophaga sp. through its morphological, physiological, and biological characteristics. For the production of agar degrading enzyme, 0.3% nutrient broth, 0.2% yeast extract and 0.5% agar was used as nitrogen and carbon source, respectively. The optimal initial pH, NaCl and temperature for the agar degrading activity of Cytophaga sp. were 7.0, 2.0% and 30±2℃ , respectively. Agar degrading activity of enzyme obtained from Cytophaga sp. was increased until the incubation of 96hrs, but after 96hrs, the activity was decreased.

Taxus brevifolia와 Taxus cuspidata 현탁세포배 양에서 taxa!의 생산에 가장 적합한 초기 접종농도 를 결정하기 위해 접종농도를 세포생체중량으로 2.5, 5 5, 7.5, 10 g/flask가 되도록 변화시켜 세포의 생장 과 taxol의 생산을 측정하였다. Taxus brevifolia의 경우 초기 접종농도가 높을수록 lag phase가 감소되 는 경향을 보였으며, 두 가지 세포주(Taxus bre­1 vifolia와 Taxus cuspidata)에서 모두 초기 접종농도 를 5 g/flask가 taxol의 생산에 최척 임을 확인할 수 있었다. Taxol 생산에 가장 척합한 초기 접종농도로 생장배지와 생산배지에 세포를 접종시켰을 때 생장 배지에서는 taxal이 검출되지 않았지만 6% 자당을 이용한 생산배지에서는 9일째 taxol이 최대로 생산 되었다가 이후 다시 줄어드는 경향을 보였다.

Optimum inoculum concentration for the production of taxol was determined in Taxus brevifolia and Taxus cuspidata cell suspension cultures. By fresh weight, 2.5, 5, 7.5, 10 g/flask of cells were inoculated and cell growth as well as taxol production were examined. In both Taxus cell cultures, the higher the inoculum concentration, the shorter the length of the lag period. The optimum inoculum concentration for taxol production was found to be 5 g/flask. To produce taxol in large quantity, utilization of proper medium was thought to be important. In case of using a production medium with 6% sucrose, taxol production was noticed. Its level reached the maximum at the 9th day of culture and decreased afterwards. However, taxol was not detected from cell cultures in growth medium.

H형 Dowex 50W-X8 강산성 양이온 교환수지 결럼을 이용하여 glutamic acid를 치환전개하면셔 displacer의 농도를 증가시켜 인위적으로 결정화를 유도하였다. Displacer로 사용한 NaOH 놓도를 증 가시킴으로써 glutamic acid가 그 용해도 한계 이상 으로 농축되면서 컬럼내에서 이동도중 결정층이 형 성되었고 생성된 결정은 effluent stream을 따라 fraction collector로 회수되어졌다. 결정충이 이동하는 동안 clogging이나 압력강하의 문제점이 발생 하지 않았으며 1.0 M NaOH를 사용할 때 62% 의 glutamic acid가 결정으로 회수되었다. 수지로부터 치환되 어 나오는 H+에 의한 OH 의 중화작용으로 인해 NaCI 보다는 NaOH가 효과적인 displacer임 을 알 수 있었으며 보다 sharp하고 농축된 band를 얻을 수 있었다 Glutamic acid 결정층의 이동속도 는 displacer 이통속도와 통일하였는데 그 이유는 결정이 이동하는 기작이 고정상의 interstitial fluid를 따라 이통하는 것이 아니라 일정한 두께의 결정층이 형성된 뒤에 앞경계변에셔는 계속 새로운 결정화가, 그리고 뒷경계변에서는 기존결정의 재용해가 일어나 면서 컬럼을 이동하는 것이며 또한 이 결정화 속도 와 재용해 속도가 비슷하게 균형을 이루고 있기 때 문이라고 설명할 수 있다. 이와 같은 이온교환중의 결정화 현상은 수지에 대한 선택도와 함께 용해도라 는 부가적 분리 인자를 통시에 사용함으로써 특정성 분의 분리효율을 높일 수 있으며 이온교환 후 추가 로 거쳐야 할 결정화 콩정의 부담을 줄일 수 있을 것이다. 결정화-재용해가 비슷한 속도로 반복되는 이통결정층이 형성된다는 관찰은 본 실험에서 사용 된 glutamic acid에만 적용할 수 있는 특이한 현상 일 수 있으며 aspartic acid 등 다른 저용해도 아미 노산에도 일반화할 수 있는 현상인지를 밝허가 위해 서는 보충 연구가 펄요하다. 더우기 이러한 결정화 현상은 단순히 용질의 용해도와 displacer 농도뿐만 아니라 pH, ionic strength, 사용하는 수지의 가교 도, mobile phase의 유속, 사용하는 컬럼의 제원에 도 영향을 받을 것이라고 사료되므로 결정회수율을 극대화하기 위한 최적조건의 도출 빛 그 적용범위의 확대에 대한 연구가 필요하다.

A specific ammino auid in a mixture can be crystallized inside an ion exchange column when displacer concentration is high enough to concentrate the amino acid in a pure band beyond its solubility limit. Glutamic acid formpd a discrete crystal layer in a cation exchanger column by operating displacement development mode and using a high concentration of displacer NaOH. The glutamic acid crystal formed was eluded from the column with the effluent stream and collected in a fraction collector. When 1.0 M of NaOH was used as a displacer, more than 60% of the loaded glutamic acid was recovered as crystal. The continuous crystallization and dissolution of crystal occurred, resulting in apparent movement of the crystal along the column without clogging or pressure increase. NaOH was proved a better displacer than NaCl because hydroxide ions neutralized hydrogen ions released from the resin and thus reduced the number of hydrogen ion competing with sodium ion for re-adsorption. The displacement development process coupled with crystallization provided higher concentration and recovery of glutamic acrid than conventional chromatography.

Wild-type 곰팡이인 Tolypoc/adium inflatum의 고정상배양을 통해 탄소원, 질소원, 아미노산 등이 peptide 항생제 계통 의 면역억제제인 cyclosporin A(CyA) 생합성에 미치는 영향을 조사하였다. 질소 원으로서 ammonium sulfate가 첨가된 경우에, f fructose 또는maltose 등을 탄소원으로 이용하는 배 지가 glucose가 첨가된 배지에 비해 월등히 높은 C CyA 생산성을 보였으나. ammonium sulfate의 부 재시에는 탄소원들의 종류에 관계없이 CyA 생산성 이 매우 낮게 나타났다. 질소원의 경우는 무기 질소 원인 ammonium sulfate가 CyA 생산에 가장 훌륭 한 성분으로 작용했으며, 그밖에 ammonium phos p phate, ammonium citrate 역시 CyA 생산을 어느 정도 증가시키는 효과를 보였다. 최척 ammonIum s sulfate의 농도는 109/L로 밝혀 졌으며 배양초기 에 a ammonium sulfate릎 첨가해 주는 경우가 배양중간 에 첨가하는 경우보다 CyA 생산에 더 효율적인 것 으로 나타났다. 아미노산의 경우 L-valine에 의한 C CyA 생합성 증진 효과가 가장 투렷하게 나타났다. 최적 L-valine 농도는 109/L이였으며 L-valine이 배양 초반부터 배지 중에 존재하는 것이 CyA 생합 성에 가장 유리한 것으로 나타났다.

The effects of important medium components such as carbon, nitrogen sources and amino acids on the production of cyclosporin A(CyA) were investigated in an immobilized fungal cell fermentation using Tolypocladium inflatum. As carbon sources in the synthetic medium, fructose and maltose stimulated CyA production remarkably compared to glucose when ammonium sulfate was supplemented as a nitrogen source. In the absence of ammonium sulfate in the medium, however, CyA biosynthesis was reduced considerably without regard to C-sources tested. Ammonium sulfate was found to be the best N-source, and also ammonium phosphate and ammonium citrate showed some positive effects on CyA production. Optimum concentration of ammonium sulfate was 10g/L, and supplementation of ammonium sulfate at the start of fermentation was found to be the most efficacious for maximal production of CyA. Among the constituent amino acids of cyclic peptide, CyA, L-valine had the most significant effect on the biosynthesis of CyA, and maximum CyA production was observed when 10 g/L of L-valine was initially added.