Earticle

Saccharomyces sake Kyokai No.7을 이용한 고정화 균체 반응기에서 연속 알콜생산시에 발효배지 성분을 1/10배 ~3/10배 범위에서 희석하여 사용할 때 균체의 생산성과 고정화 beads의 물리적 안정성이 장기적으로 유지되었다. Egg albumin hydrolysate (0.5%)와 phosphatidylcholine(0.5%)을 첨가한 발효배지를 3/10배 희석하여 공급할 때 1.1lhr-1 희석 율에서 최대 알콜생산성인 69g/l-hr 이 얻어졌으며, 이는 무첨가물의 2/1011H 희석 발효배지의 최대치인 46g/l-hr 에 비하여 50% 증가한 것이다.

For continuous ethanol production In an immobilized cell reactor consisting of Saccharomyces sake, feedings of one tenth to three tenths times diluted fermentation media were effective for maintaining the high ethanol productivity and physical stability of immobilized beads. In case two tenths times dilltued one of the fermentation medium supplemented with egg albumin hydrolysate(0.5%) and phosphatidylcholine(0.5%) was fed, a maximum ethanol productivity of 69g/l-hr was attained at a dilution rate of 1.1lhr-1, and it was 50% higher than that of the two tenths times diluted one of the fermentation medium without any supplement, 46g/l-hr.

염색가공 폐수 중 난분해성 물질이 PYA를 처리 하기 위하여, 한천-acrylamide를 이용한 bead를 제 조한 후 air-lift 반응기에서 연속실험을 행하였다. 합성폐수의 PYA놓도가3,100mg/l . 체류시간 24hr일 때 유출수의 농도는 4500mg/l 이며, 제거효율은 85% 이상을 나타내었다. 실제 호발폐수의 경우 PYA 및 COD농도가 3,253mg/l, 4,500mg/l 일 때, 체류시간 24hr에서 유출수의 농도는 840mg/l,480mg/l 이며, 제거효 율은 81.3%와 85.2%로 각각 나타났다. bead의 지름이 lmm일 때는 내부의 미생물 성장 이 양호하였으나 bead의 지름이 2mm일 때는 기질 과 산소전달저항에 의하여 반지름의 48% 이상은 미 생물의 성장이 저해를 받았다. 고정화 반응기에서 전체 기질 제거속도 중 bead 내 고정화 cell의 제거 분율은 평균 70%로 나타났다. 현탁 반응기에서 희석율 이상에서는 기질 이용속도가 감소하였으나 고정화 반응기에서는 희석율 0.125hr-1까지 거의 선형척으로 증가하였다. PYA 제거속도식에서 포화상수 K1=6.60(gPVA/l)와 최대 비기질 이용속도 k=0.175(g PVA/g cell.hr)를 얻었다

For the treatment of poorly biodegradable polyvinyl alcohol(PVA) in dye-processing wastewater, immobilized microbial beads were prepared by uslng agar-acrylamide method. PVA removal efficiency for the synthetic wastewater was 85% at the PVA volume loading rate of 3.1g/l day. In case of real desizing wastewater, PVA removal efficiency was 81.3% at the PVA volume loading rate of 3.25g/l day. In observation of cross section of immobilized bead passed 5 months with diameter of 2.4mm, the growth of cell was limited by the resistance of substrate and oxygen transfer for the inners region of more than 48% of bead radius from the surface. It was estimated that 70% of total removed PVA was degraded by the immobilized cells in the continuous immobilized reactor. Substrate utilization rate in the suspended reactor was decreased with increasing dilution rates above 0.083 hr-1, but that in the immobilized reactor was increased with increasing dilution rates up to 0.125hr-1. The substrate removal efficiency of immobilized reactor was much superior to that of suspended reactor with increasing dilution rates. Saturation constant of substrate utilization rate equation, Ks was 6.6gPVA/l, and maximum specific substrate utilization. k was 0.175g PVA/g cell.hr

r-Glutamylcysteine 생산에 있어서 재조합 대장 균 HB101/pGH501만을 이용한 단일세포반응계가 재조합 대장균과 효모를 이용한 흔합서l포반응계보다 반응시간이 짧고 생산농도가 높은 것으로 나타났다. 그러나 생산경제성 측면에서 ATP 재생공정을 위하 여 훈합세포반응계를 사용하였다. 재조합 대장균과 효모를 이용한 혼합세포반응계에서 대장균과 효모의 비율은 1:4가 적합함을 보였고, ATP 재생공정에 사용되는 glucose는 O.5M의 농도에서 가장 효율적 으로 나타났다. 재조합 대장균과 효모를 alginate를 이용하여 고정화하여 반응계로 사용하였을 경우 반 응에 필요한 시간이 걸어지고 생산놓도도 감소되냐 반응계의 안정성은 10% 정도 증가됨을 알 수 있었다. 실험결과 alginate로 고정화된 흔합세포반응계 를 사용하여 r-glutamylcysteine를 연속 생산할 수 있음을 확인하였다.

r-Glutamylcysteine production by the immobilized microbial system of recombinant Escherichia coli and yeast was investigated. r-Glutamylcysteine was synthesized from L-glutamic acid and L-cysteine in the presence of ATP by the reaction catalyzed by r-glutamylcysteine synthetase. An immobilized microbial cell system was developed for the efficient r-glutamylcysteine production. Recombinant Escherichia coli and yeast were immobilized by alginate. Production of r-glutamylcysteine was better with the recombinant Escherichia coli for both the synthesis of r-glutamylcysteine and the ATP regeneration than the mixed system of recombinant Escherichia coli and yeast. The proper radio of recombinant Escherichia coli to yeast was experimentary observed to be 1:4 in the mixed system. Although the immobi1ized system had the slower reaction rate, its reaction stability was increased by 10%

본 연구는 비용매첨가법에 의한 "native" dextran 의 분별침전에 관한 내용으로, 첫째, 유전상수값이 다른 비용매들에 의한 dextran의 침전 특성을 조사 하였다. 둘째. dextran생산에셔 분별침전 과정의 방 법적 인 개선을 시도하였다. 침전특성을 조샤한 결과, 침전된 dextran은 비용매 함량과 일차함수관계를 보였고, 그 일차식의 가울기는 비용매의 유전상수값 과 상관관계를 보이므로서. dextran의 침전을 유도 하는 주요특성이 비용매의 유전상수임을 알았다. 그 리고 재분별에 의한 침전방법을 원용하여 dextran 의 분별침전 과정을 구성하였으며, dextran의 침전 특성 결과와 조합하여 일정한 분자량 빛 분자량 분 포를 갖는 dextran을 효율적으로 생산할 수 였는 근거를 마련하였다.

Fractional precipitation of "native" dextran by the method of nonsolvent addition was studied. Precipitational phenomenon of fractioned dextran was characterized with the quantitative determination of the precipitational capacity of nonsolvents with different dielectric constants. Based upon this characterization, the fractional precipitation process for the dextran production was developed. From the precipitational characteristics, a first-order relationship between the molecular weight of fractioned dextran and the content of nonsolvents was formulated. The slopes of the first-order equation were correlated with the dielectric constants of the nonslovents. A modified fractionation process was constructed on the basis of refractionation method and employed to increase the efficiency of the controlled production of dextran.

Trigonopsis variabilis는 버l타락탐 항생제인 cephalosporin C (ceph C)를 -keto-adipyl-7 a aminocephalosporanic acid(AKA-7 ACA)로 생변 환하는 강력한 D-amino acid oxidase 효소를 갖고 있다. 본 연구는 이 D-AAO 효소의 유전자를 추출하기 위하여 polymerase chain reaction (PCR)을 사용하였다. PCR 단편을 콜로닝하기 위하여 Taq D DNA polymerase, Klenow, T4 DNA polymerase I, Alkaline phosphatase Calf Intestinal와 T4 kinase 의 효소반응을 이용하여 4가지의 방법을 샤용한 결 과, blunt - end 의 PCR fragment 를 phosphory­l lation하고 blunt -end의 pUC18 plasmid를 dephos phorylation 한 후 ligation 한 것 이 가장 좋은 클로 닝 효율을 보였다. Ceph C에 대한 D-AAO 효소의 활성은 재조합 E. coli의 세포추출액과 permea bilized cells에서 모두 확인할 수 있었다.

Trigonopsis variabilis is a strong producer of D-amino acid oxidase that can transform cephalosporin C(ceph C) to -keto-adipyl-7-aminocephalosporanic acid(AKA-7ACA). Polymerase chain reaction (PCR) was applied to isolate the D-AAO gene from T. variabilis. To clone the PCR fragment, four different methods were examined using enzymatic reactions of Taq DNA polymerase, Klenow, T4 DNA polymerase I, Alkaline phosphatase Calf Intestinal, and T4 kinase. Ligation of phosphorylated blunt-end PCR fragment and dephosphorylated blunt-end of pUC18 plasmid yielded the best cloning efficiency One of recombinant E. coli transformants showed D-AAO activity against ceph C in both cell extracts and permeabilized cells.

met-hGH로부터 고정화 ApM에 의해 전환된 천 연형 hGH를 등전위점, 소수성, 전하량의 차이에 따라 3회의 일련의 크로마토그래피를 수행하여 정제하고, 정제된 hGH의 특성을 조사하였다. 정제한 hGH의 비활성은 효소면역측정법으로 분석하였을 때 2 2.75IUjmg이었고, hGH 회수율은 14.1%이었다. 정제한 재조합 hGH는 아미노산 조성, 아미노 말단의 15개의 아미노산 서열 분석, 카르복시 말단의 아미노산 분석, 트럽신 가수분해 랩타이드들의 HPLC 분석등을 통해 아미노말단 에치오닌이 제거된 천연 형 hGH임을 알 수 있었고, SDS-PAGE, native­P PAGE, IEF, RP-HPLC, HSGF 등의 분석 결과 정제한 hGH는 상용품보다 순도가 높다는 것을 알 수 있었으며, 뇌하수체 제거 쥐의 체중 증가와 경골성 장폭의 증가를 통한 활성 측정 결과 정제한 hGH는 상용 hGH와 같은 정도의 활성을 냐타내었으며 우혈청 알부민을 주사한 대조군에 비해 뚜렷한 성장 효 과를 나타냈다. 따라서 본 연구에셔 정제한 hGH는 천연형이며, 높은 순도와 우수한 생리활성을 나타내는 것을 알 수 있었다.

The authentic hGH converted from met-hGH by immobilized ApM was purified by successive chromatographic processes based on the differences in isoelectric points, hydrophobicities and charges. The final recovery yield was about 14.1% and the specific activity of the purified hGH was 2.75IU per mg when assayed by enzyme immunoassay. The purified hGH was verified to be authentic hGH through the analysis of amino acid composition, amino-terminal amino acid sequence, carboxy-terminal amino acid and tryptic peptide map. The purity of purified hGH was higher than that of commercial hGH when assessed by SDS-PAGE, PAGE, IEF and HSGF. In weight-gain assay and tibia test with hypophysectomized rats, the hGH produced in this study showed the same growth effect as the commercial hGH.

Aminopeptidase M(ApM)을 Cellufine Formyl 에 고정화시켜 고정화 효소의 반응특성을 고찰하고, 고정화 ApM을 충진한 column reactor를 이용하여 메치오닐 인간 성장 호르몬(met-hGH)으로부터 천연형 인간 성장 호르몬(hGH)의 연속 생산을 검토 하였다. Cellufine Formyl 19 gel당 2.3mg의 ApM 이 결합되었을 때 met-hGH의 hGH로의 전환능력이 가장 우수하였다. Soluble enzyme과 고정화 효 소의 반응 최적 pH는 7.0, 반응 최적 온도는 55℃로 통일하였으나 고정화에 의해 pH 벙위가 보다 넓 어졌으며, column reactor에서 연속 운전시 최적온 도 역시 55℃로 나타났다. Column reactor를 이용 한 천연형 hGH의 연속 생산시 met-hGH가 100% 전환되는 조건에서 hGH 수율과 생산성은 각각 약 77%와 약 0.8mg hGH/ml.h이었다. 반응기 크기 를 5배 증가시켰을 때 두 반융기에서 유속 SV 값이 통일하면 met-hGH 전환율과 hGH 수율이 통일하 였으며, 90일간의 연속 운전 결과로 예측한 column reactor의 반감기는 45t에서 228일, 55℃에서 81 일로 비교척 안정하였다.

The characteristics of aminopeptidase M(ApM) immobilized covalently on Cellufine Formyl and the continuous production of authentic human growth hormone(hGH) from methionyl human growth hormono(met-hGH) using the column reactor packed with immobilized ApM were investigated. Immobilized ApM with the proportion of 2.3mg ApM per 1g Cellufine Formyl gel had the highest met-hGH conversion activity. The optimum pH(7.0) and temperature(55℃) showed no appreciable difference between free and immobilized enzymes and the optimum temperature in continuous operation of the column reactor was also found to be 55℃. Under the conditions at which met-hGH was converted completely to hGH, the yield and productivity were about 77% and 0.8mg hGH/mlh, respectively. In two column reactors of different sizes, met-hGH was converted to hGH with the same conversion rates and hGH yields at the same space velocities. The half-life of the reactor systems at 45℃ and 55℃ were projected from the continuous operations for 90 days to be 225 days and 81 days, respectively.

Vero 세포를 이용한 뉴캐슬병 바이러스 생산에서 pH, 온도, 혈청농도, M.O.I. 등의 최적조건을 구하고 polycation, 항산화제, 그리고 DMSO 등의 첨가제가 바이러스 생산에 미치는 영향에 대한 연구를 수행하였다. 뉴캐슬병 바이러스의 최적 배양조건은 초기 p pH 7.2, 혈청농도 2 % FBS, 바이러스 접종량 0.1 M.O.I. 및 바이러스 증식온도 34℃로 확인하였다. Polycation 인 DEAE-dextran, poly-L-Iysine과 항 산화제인 ascorbic acid는 각 15ug/ml,3ug/ml그리고 0.1mM의 최적농도로 첨가했을 때 대조군에 비해 상당히 증대된 최대 바이러스 수율을 얻을 수 있었다.

Studies on the production of Newcastle disease virus(NDV) were carried out to optimize culture conditions such as initial pH, temperature, serum concentration, multiplicity of infection(M.O.I.) as well as the addition of polycation, antioxidant, and DMSO. Initial pH from 7.2 to 8.1 showed little difference on NDV production but the initial pH below 6.8 resulted in the negative effect. The highest NDV titer was obtained at 0.1 M.O.I. In addition, the maximum production of virus was achieved at 2% FBS and optimum temperature was found to be 34℃. Treatment of polycoation increased the virus production. When ascorbic acid was added as an antioxidant, NDV production was also enhanced. Utilization of DMSO, a well-known permeabilizing agent, showed an inhibitory effect on the propagation of NDV.

과산화수소는 유기물에 접촉시에 물과 산소로 급속하게 분해되어 탄수화물과 같은 고분자물질을 저 분자물질로 분해하는 특성을 지니고 였다. 이러한 특성이 inulin의 산 가수분해 반응에 미치는 영향을 초음파를 조사시키면서 연구하였다. 반응조건은 온도가 50[?][?][?]60℃ 엽산의 농도가 O.1~O.3%(w/w) 였고, 이 조건하에서 과산화수소 농도가 2.3% (w/v) 일 때 가수분해 효과가 최대로 나타났다. 과산화 수소의 첨가로 control 반응에 비해 9~43% 의 분 해속도 증가를 보였다. 과산화수소를 첨가했을 경우 와 첨가하지 않았을 경우에 활성화에너지는 각각 26kcal/mol과 25kcal/mol로 거의 통일하였다. 따라서 과산화수소에 의한 inulin 가수분해 속도의 상승 효과는 frequency factor의 증가로 해석되 었다.

Hydrogen peroxide has a characteristic of being dissociated rapidly into atomic oxygen and water when it is contacted with organic materials, resulting in a decrease in molecular weight of a polymer like carbohydrate. This effect on inulin hydrolysis under ultrasound irradiation was investigated. Maximum effect of hydrogen peroxide appeared at the H2O2 concentration of 2.3%(w/v) under the range of 50[?][?][?]60℃ and 0.1∼0.3%(w/w) HCl. Compared to control reactions, the promotion effect reached 9∼43%. The activation energy, 26kca1/mo1, of inulin hydrolysis with H2O2 addition was similar to that without H2O2 addition, 25kca1/mo1. This implies that the rate enhancement of inulin hydrolysis with H2O2 addition is due to the increase of frequency factor

액화 실험에서 BAN과 Termamyl을 비교할 때 전반적으로 Termamyl이 우수했으며 Termamyl을 (0.00625% ~0.025% 범위로 첨가하였을 때 첨가량 증가에 따른 액화반응 촉진이 뚜렷이 관찰되였다. Termamyl 240uc의 경우 타파오카에 대해 최소 0 0.0125 (v/w)% 이상이 필요하였고, 반응시간은 2 시간 정도가 석당하였다. 최적온도는 90[?][?][?]95℃ 이었고 pH는 5.8 부근이 최척이였다. 반응초기 점도가 매우 높게 나타나는데 호화속도를 약간 줄이가 위해 초기 온도를 70℃정도로 낮추는 갯이 좋았다. 당화실험에서는 Novo AMG 및 국내 도일 산엽 당 화효소 모두 액화된 타피오카 용액을 잘 당화시켰다. 그러나 Novo AMG와 도일 당화효소의 활성은 기 질 에 따라 약간썩 탈랐다. 즉 이당류인 말토오스를 기 질 로 할 때는 Novo AMG의 단위 부피당 활성이 도일 당화효소의 약 1.2배이였으나, 전분을 기질로 할 때는 활성비가 1.5배였다. 경시적으로 볼 때 초기에는 당화 속도가 빨랐고 포도망이 축적되는 후기에는 당화속도 가 감소하였다. 당화의 최적온도는 약 55[?][?][?]60℃ 부근이었고 pH는 조절하지 않는 경우 (pH 5.7)와 조절 한 경우 (pH 4.3)간에 차이가 없었다. 85% 이상의 당화를 위해서는 타피오카 샤용량에 대해 Novo AMG 400uc을 기준으로 O.0625(v/w)% 이상, 그 리고 10시간 이상의 반응사간이 필요하였다.

For fuel alcohol production, enzymatic liquefaction and saccharification of tapioca starch by -amylase and glucoamylase were studied. The thermophilic a-amylase Termamyl produced from Bacillus licheniformis gave a better liquefaction than the relalively low temperature enzyme BAN from B. subtilis. Oplimal temperature and pH with Termamyl were 90[?][?][?]95℃ and 5.8, respectively. Minimal amount of Termamyl 240uc for a satisfactory liquefaction for a two-hour reaction was about 0.0125% (v/w) with respect to the mass of tapioca used. For saccharification experiments two enzymes, Novo AMG and Do-I1 enzymes were compared. The enzymatic activity of each enzyme was a little different depending on the substrate used and the latter was found to have a significant amount of a-amylase activity. With Novo AMG optimal temperature was about 58℃The pH optimum was 4.3 with maltose, however, with tapioca, no difference was observed between pH 4.3 and 5.7 which is a natural, unadjusted pH of liquefied tapioca. For 85% of completion of saccharification, it was necessary to use 0.0625% (v/w) of Novo AMG 400L for tapioca and to run the reaction for more than 10 hr, Packed volume of solid particles in tapioca slurry remained at around 30% during liquefaction and saccharification. This indicates that the removal of the solid particle before fermentation is not economically feasible at all, even though the solid particles make it very difficult to operate the bioreactor in a continuous mode with cell-recycle.

유전자 재조합 단백질 생산을 위한 곤충세포- 배쿨로바이러스 시스템에 있어서, 바이러스에 감염시 키는 시기가 늦을수록 재조합 단백질의 발현이 낮게 나타났다. 이것은 높은 세포농도일수록 단위세포당 낮은 발현율을 의미하므로 재조합 단백질 생산을 위 해 감염시기에 대한 최적화의 필요성을 보여주며, 재조합 단백질의 최대 생산생을 위한 최적 감염시기 의 존재를 실험적으로 업증하였다. 또한 배지에 5% 누에 체액을 보강함으로써 발현율이 증가하였고, 이 것은 누에 체액 첨가로 인해 세포내 바이러스 숫자가 증가하고 감염 후 세포의 생존성이 오래 유지되 는 것에 기 인하는 것으로 생각된다. 고농도 세포배 양을 위해 yeastolate를 첨가하고, 재조합 단백질 발 헌을 위해 누에 체액을 첨가함으로써 B-galactosidase의 생산이 10배 정도 증가하였다.

Insect cells were grown and infected with baculovirus for the production of recombinant protein. Later infection gave the lower expression of recombinant protein. This indicates that the expression rate is lower at higher cell concentration. This phenomena provides a well-posed optimization problem with respect to the infection time. The optimal infection time was experimentally shown to exist for the maximum productivity of recombinant protein. Also, the expression increased with the addition of 5% silkworm hemolymph. This is considered to be due to the increase of intracellular viruses and the longevity of viable cells after the infection. The production of B-galaclosidase increased about ten-fold with the addition of yeastolate and silkworm hemolymph for high cell density and high expression, respectively.

Hybridoma 세포의 세포 성장 속도, monoclo nal antibody의 생산성 및 세포 대사에 미치는 glucose의 영향이 조사되었다. IgG2,를 생산하는 m mouse-mouse hybridona VIII H-8 세포가 모델로 이용되었다. Glucose 농도에 따른 바성장속도의 변화는 기질저해형식 (substrate inhibition type) 의 성장모델로 나타낼 수 있었다. 초기 glucose 농도 4g/f까지는 최대 세포밀도의 증가를 보여 주었다. Glucose는 세포사망속도에 큰 영향을 나타내었고 glucose 농도와 비사망속도 간에는 반비례의 관계가 성립됨을 보였다. Glucose 농도가 증가될수록 세포의 생존율과 monoclonal an tibody의 생산이 증가되었다. Glucose 놓도가 증가될수록 glucose의 비소비속도가 증가되 었고, 초기 glucose 농도의 증가는 lactate의 총괄 비 생산속도의 증대를 가져왔다. 암모늄 이온의 총괄비 생산속도는 초기 Glucose의 농도에 의존하 였지만 암모늄 이온의 전반적인 생성속도는 초기 glucose 농도에 거 의 무관함을 보여 주었다

The effects of glucose on cell growth kinetics, monoclonal antibody productivity, and cell metabolism or hybridoma cells were investigated. The mouse-mouse hybridoma cell line VIII H-8 producing mouse IgG2a was used as a modal system. Glucose showed substrate inhibition type dependence on specific growth raie. The maximum cell density increased as initial glucose concentration increased up to 4 g/l. Glucose showed a strong influence on cell death kinetics, and an inverse relationship between specific death rate and glucose concentration was found. Cell viability and monoclonal antibody production increased as initial glucose concentration increased. The specific glucose consumption rate increased with glucose concentration, and cumulative specific lactate production rate increased with increasing initial glucose concentration. The overall kinetics of ammonium ion production was almost invariant with respect to initial glucose concentration, while the cumulative specific ammonium ion production rate was dependent on initial glucose concentration.

농산 폐기물인 배추 뿌리에 다량으로 존재하는 peroxidase를 산업적으로 이용하기 위하여 배추 뿌 라를 JUicer로 대량 추출하여 객상효소 부분과 고형 물 부분을 얻었다. Peroxidase는 액상 부분에 약 6 66%, 고형물 부분에 34%가 분포되어 있으므로 두 부분을 모두 이용하여 phenol성 폐수의 효소적 처리를 검토하였다. Batch stirred reactor에서 액상효소() 를 이용하여 150ppm의 phenol 용액을 처리한 결과 3시간 후에 96% 의 phenol을 중 합시켜 침전으로 제거할 수 있었다. 한편 pulp를 이용한 air lift reactor() 에서는 120ppm의 초기 phenol 농도로부터 5ppm까지 제거할 수 있 다. Batch stirred reactor에 비하여 air lift reactor에 첨가된 효소의 양이 1/3임에도 불구하고 거의 비숫한 phenol 제거 효율을 냐타내었다.

Solid and liquid phase peroxidases were extracted from Chinese cabbage roots by using commercial juicer in order to use peroxidases from agricultural waste for industrial applications. Since peroxidases are distributed into 66% in liquid (juice) and 34% in solid phase (pulp), enzymes from both phases were applied to investigate the enzymatic removal of phenol from waste water. After contacting 150 ppm Phenol solution with liquid phase enzyme () for 3 hours in a batch stirred reactor, 96% of phenol could be removed through polymerization and precipitation. Also, phenol could be removed from initial 120ppm to 5ppm by applying solid phase enzyme in an air lift reactor (). Almost equivalent efficiencies of phenol removal were observed between two systems, even though only one third of the enzymes in batch stirred reactor was applied in airlift reactor. The possible reason for this phenomenon is because peroxidases exist as immobilized forms in solid phase.

LeI은 스테로이드를 통울에 투여하였을 때 분비가 촉진되어 항염증성 효과를 나타내는 calcium 의 존성 phospholipid 결합 단백질이다. S. cerevisiae는 대장균과 통물세포의 장점을 모두 가지고 있으므로 동물세포 유래의 이종 단백질의 분비 생산에 많이 이용되고 있다. 본 연구에서는 GAL10 promoter­p ppL-LCI유전자 LCI terminator로 구성된 pYGLPT5 로 LCI을 S. cerevisiae SEY2102에서 발현 분비시키고 각 분획으로 나누어 LCI양을 비교한 결과 protoplast 68.6 %. periplasmic 24 %, culture supernatant 7.4%로 분포하였다. pYGLPT5로 형질전환된 S. cereviswe 2102를 유가 배양한 결과, 최종적인 LCI의 생산량은 약 였다. LCI은 N 말단 부근에 결합부위가 있으므로 이를 이용하여 hydroxylapatite column chromatography로 정 제하 였다. 배지로 분비된 34kDa LCI을 ultrafiltration 과 hydroxylapatite column chromatography 의 두 단계로 순도 99% 이상으로 정제할 수 있었다

Human lipocorin-I(LCI) is a calcium ion-dependent and phospholipid-binding protein which exhibits an anti-inflammatory activity by inhibiting phospholipase A2 activity. In this study, the LCI gene containing its own terminator region was joined to GAL10 promoter-ppL (prepro-leader sequence of mating factor a). An ATG start codon of LCI gene was placed at downstream with KR endoprotease recognition site(Lys-Arg) of ppL. Recombinant S. cerevisiae harboring the LCI expression/secretion vector, pYGLPT5, was aerobicall grown on a liquid YPDG medium al for 72hys. The whole cell and culture supernatant were separated after centrifugation, and the expressed LCI was analyzed by SDS-PAGE and western blotting methods. A majority fraction of the expressed LCI was found to be accumulated in the intracellular fraction, resulting in very low secretion efficiency of about 7.4%. About of LCI was extracellularly produced by the fed-batch culture employing the controlledfeeding of glucose and galactose. The secreted LCI was purified by ultrafiltration and hydroxylapatite column chromatography, and a purity of more than 99% was obtained.