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초록

영어

Human lipocorin-I(LCI) is a calcium ion-dependent and phospholipid-binding protein which exhibits an anti-inflammatory activity by inhibiting phospholipase A2 activity. In this study, the LCI gene containing its own terminator region was joined to GAL10 promoter-ppL (prepro-leader sequence of mating factor a). An ATG start codon of LCI gene was placed at downstream with KR endoprotease recognition site(Lys-Arg) of ppL. Recombinant S. cerevisiae harboring the LCI expression/secretion vector, pYGLPT5, was aerobicall grown on a liquid YPDG medium al for 72hys. The whole cell and culture supernatant were separated after centrifugation, and the expressed LCI was analyzed by SDS-PAGE and western blotting methods. A majority fraction of the expressed LCI was found to be accumulated in the intracellular fraction, resulting in very low secretion efficiency of about 7.4%. About of LCI was extracellularly produced by the fed-batch culture employing the controlledfeeding of glucose and galactose. The secreted LCI was purified by ultrafiltration and hydroxylapatite column chromatography, and a purity of more than 99% was obtained.

한국어

LeI은 스테로이드를 통울에 투여하였을 때 분비가 촉진되어 항염증성 효과를 나타내는 calcium 의 존성 phospholipid 결합 단백질이다. S. cerevisiae는 대장균과 통물세포의 장점을 모두 가지고 있으므로 동물세포 유래의 이종 단백질의 분비 생산에 많이 이용되고 있다. 본 연구에서는 GAL10 promoter­p ppL-LCI유전자 LCI terminator로 구성된 pYGLPT5 로 LCI을 S. cerevisiae SEY2102에서 발현 분비시키고 각 분획으로 나누어 LCI양을 비교한 결과 protoplast 68.6 %. periplasmic 24 %, culture supernatant 7.4%로 분포하였다. pYGLPT5로 형질전환된 S. cereviswe 2102를 유가 배양한 결과, 최종적인 LCI의 생산량은 약 였다. LCI은 N 말단 부근에 결합부위가 있으므로 이를 이용하여 hydroxylapatite column chromatography로 정 제하 였다. 배지로 분비된 34kDa LCI을 ultrafiltration 과 hydroxylapatite column chromatography 의 두 단계로 순도 99% 이상으로 정제할 수 있었다

목차

ABSTRACT
 서론
 재료 및 방법
  사용균주 및 Plasmid
  배지 및 배양방법
  시약 및 재료
  SDS-PAGE, Silver Staining 및 Western Blotting
  Zymolyase 처리에 의한 세포의 분획
  LCI의 생산 및 정제
  분석 방법
 결과 및 고찰
  LCI 의 발현 및 분비
  발현된 LCI의 국재성(iocalization)
  발효조에서 LCI의 생산 및 정제
 요약
 참고문헌

저자

• 김병문 [ Byung-Moon Kim | 한국과학기술연구원 생명공학연구소 ]
• 정봉현 [ Bong-Hyun Chung | 한국과학기술연구원 생명공학연구소 ] Corresponding Author
• 이상기 [ Sang-Ki Rhee | 한국과학기술연구원 생명공학연구소 ]
• 박영훈 [ Young-Hoon Park | 한국과학기술연구원 생명공학연구소 ]
• 남수완 [ Soo-Wan Nam | 동의대학교 미생물학과 ]

참고문헌

발행기관

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• 간행물명

  KSBB Journal

• 간기

  격월간

• pISSN

  1225-7117

• 수록기간

  2009~2013

• 십진분류

  KDC 476 DDC 576