Earticle

대장균의 lipoprotein promoter, lactose promotor 및 operator 와 lipoprotein의 signal sequence 를 가지는 vector에alpha-IFN 유전자가 cloning된 plasmid pIF-Ill-B를 여러종류의 대장균 숙주 세포에 형칠전환하여 alpha-IFN 의 생산성, 생장특성을 조사하였다. 또한 plasmid 자체와 cloning된 alpha-IFN 유전자의 발현유도가 세포생장에 미치는 영 향을 조사하였다.

The growth behavior of recombinant Escherichia coli cells having plasmid pIF-III-B, which carries human alpha-interferon gene under the control of lpp promoter, lac promoter and lac operator, was studied by using of various E. coli host strains. Expression of the alpha-IFN gene is controllable by using inducer IPTG because the plasmid also contains lacI gene which produces lac regressors. The repressors block the transcription of alpha-IFN gene. There were considerable differences in cell growth according to the host strains used. Cell growth was inhibited not only by plasmid pIF-III-B itself but also by the induction of alph-a-IFN gene expression. Growth inhibition caused by the plasmid itself was more serious than that caused by the induction of alpha-IFN gene expression.

The characteristics of steroid acyl transferase were studied in the rat brain with (4-14C)-dehydroepiandrosterone(DHEA). The results could be summarized as followings: The enzyme system responsible for the biosynthesis was localized at the microsome fraction. The optimum pH of this enzyme was 4.6 When DHEA was utilized as substrate, 5-pregnenolone was proved to be a competitive inhibitor. However testosterone was a noncompetitive inhibitor. The acylation at 3B-hydroxyl group was favored when the hydrophilicity at Cl7 position increased. However, this acylation at C3 was very low when A ring was aromatic. The acylation at Cl7 hydroxyl group reguired an absolute 17B-conformation.

Growth properties of carrot hairy roots transformed by Agrobacterium rhizogenes were compared in flask and bioreactor. Oxygen transfer coefficient KLa was measured during the cultivation in bioreactor. In flask cultures, initially sucrose 30g/l was nearly exhausted after 20days. pH was dropped from initially 5.8 to 4.79 after 4 days, but it is stable after that time. Finally, after 28 days, hairy roots were grown about twelve times. In view of the results studied optimum conditions, hairy roots were maintained high growth rates in sucrose 50g/l, pH 5.8, total nitrogen 60mM. Also in bioreactor cultures, fixed stainless sieve in bottom and aerated 0.31 vvm, the results of cultivation by the use of sucrose 50g/l had grown about twenty-eight times and pH variations were liked in flask. As a results, growth rate of 1.756g fresh weight/day/g inoculum in bioreactor were higher about three times than 0.57g fresh weight/day/g inoculum in flask culture. KLa values were showed a tendency to decrease from 0.209 min-1 to 0.068 min-1.

양이온 계변활성제의 역미셀을 이용하여 단백질을 선택적으로 분리할 수 있는 분리조건을 밝히기 위해서 분자량과 등전점이 다른 여러 단백질의 용해에 미치는 pH, 이온 및 강도, 계면활성제의 종류 등 system para-meter 틀에 대해 연구 검토하였다. 등전점이 낮은 pepSIn 은 pH 5-7 이상에서, 등전점이 높은 ribotluclease-a 나 lisozym은 pH 11-12 이상에서 용해되어 단백질이 계면 활성제의 (+)전하와 반대전하언 (-)를 띠는 등전점 이상의 pH영역에서 용해가 가능하였다. KCI을 이용하여 이온강도를 증가시킴에 따라 단백질의 용해 정도는 전반적으로 감소하였다. 친수성부분은 동일하나 소수성 무분이 다콘 양이온계면활성제 CTAB, DDAB, TOMAC 을 이용하여 역미셀제를 변화시켰을 때, 소수성 탄화수 소사슬이 3개 인 TOMAC(Wo=5) 이 탄화수소사슬이 1개인 CTAB(Wo=28)와 2개인 DDAB(Wo=7-12)에 비해 작은 역셀을 형성하여 낮은 용해 정도플 보였 다. 찬은 DDAB에 대해서도 유기용매의 종류에 따라 W Wo가 달랐는데 benzene(Wo=7)에 비하여 ttrachloro-ethylene (Wo= 12)이 보다 큰 역미젤을 형성하고 용해 능력도 높았다.

The solubilization of BSA, pepsin, trypsin and ribonuclease-a in cationic reverse micellar solutions has been investigated. For complete solubilization into reverse micellar solutions, pH values of several pH units above the isoelectric point of each protein were required. Solubilization was observed to decrease with increasing ionic strength of KCI. The size of empty micelles showed no significant change with increasing ionic strength. Trioctylmethyl ammonium chloride (TOMAC) in cyolohexane showed the lowest solubilization for the proteins. The system didodecyl dimethyl ammonium bromide (DDAB)-tetrachloroethylene was capable of solubilizing larger amounts of proteins than the system DDAB-benzene. Cetyl trimethyl ammonium bromide(CTAB)-hexanol-isooctane system showed lower solubilization than DDAB-tetrachloroethylene system, while it had higher Wo value.

Ethanol을 주로 생산하는 균주인 Z. mobilis의 cell wall 투과성을 높인 후 고정화하여 sorbitol 생산에 이용 하였다. 그러나, toluene으로 투과성을 높은 cell은 oxidoreductase의 유출, 손실로 인하여 sorbitol conversion efficency가 급격히 저하되었다. 따라서, 이와같은 enzymcd의 유출을 방지 하기 위하여, 투과성을 향상시킨 cell을 0.25% glutaraldehyd로 처리한 후 alginate와 chitin에 고정화하여 회석율 0.2h-1에서 연속배양을 한 결과 210시간동안 효소활성도의 저하는 거의 일어나지 않았다. 이와같은 연속배양에서 얻어진 sorbitol productivity는 3.5g / l-h로 측정 되었다.

This study describes the sorbitol production with permeabilized cells of Zymomonas mobilis immobilized in Ca-alginate. Toluene treated cells lose glucose-fructose oxidoreductase activity due to leaking of enzyme from the cells. In order to prevent this leakage, the permeabilized cells were immobilized in alginate and chitin. No significant loss of enzyme activity was apparent during 210h operation in a continuous process. The productivity of the continuous process was estimated to be about 3.5g/l -h for sorbitol at dilution rate 0.2h-1.

Pseudomonas elodea 에 의한 Gellan gum생산시 이에 관련된 기초자료를 얻기 위하여 회분식 및 연속식 발효를 하였다. 회분식 배양의 결과로부터 비성장 속도는 0.16hr-1이었으며 72시간 배양후의 점도는 4500cp, 생성물 농도 0.7g dry weught/100g broth, 및 생산성은 0.08g dry weight/1/hr이었다. 연속식 배양을 통하여 최적 탄소원과 질소원의 농도비(3.0mg-carbon/mg-nitrogen)를 결정하였으며 Gellan gum의 최대 생성속도는 희석율 0.14hr-1에서 0.6g dry weight/l/hr이었다. 이러한 조건에서 각종 metabolic paeameter값을 계산하였다. 또한 배양액의 유변학적 특성은 Casson equation에 잘 부합됨을 확인하였고, 배양액의 점도와 산소전달계수를 측정하여 고점도 배양시 산소전달의 장애현상을 조사하였다

The isolation and regeneration of protoplasts are necessary for protoplast fusion of edible mushrooms. In this study, over 5107 ml-1 protoplasts of Agrocybe cylindracea were isolated using the method described by Yanagi. Enzyme mixture of cellulase Onozuka R10(2%), chitinase (0.2%) and Novozym 234(0.1%) was most effective for the isolation of protoplasts and the yield of protoplasts was 4.85107 ml-1. 0.6M sucrose was the most effective osmotic stabilizer. The maximum amount of mycelia and yield of protoplasts were obtained from 5~7 days cultured mycelia. In the case of 5~7% days cultured mycelia, the digestion time with lytic enzyme was 4~6 hours. ACM and MCM medium were most effective for the regeneration and reversion of protoplasts, and reversion frequency was 6.9~7.0%. 0.6M sucrose was most stable osmotic stabilizer.

Pseudomonas elodea 에 의한 Gellan gum생산시 이에 관련된 기초자료를 얻기 위하여 회분식 및 연속식 발효를 하였다. 회분식 배양의 결과로부터 비성장 속도는0.16hr-1 이었으며 72시간 배양후의 점도는 4500cp, 생성물 농도 0.7g dry weught/100g broth, 및 생산성은 0.08g dry weight/1/hr이었다. 연속식 배양을 통하여 최적 탄소원과 질소원의 농도비(3.0mg-carbon/mg-nitrogen)를 결정하였으며 Gellan gum의 최대 생성속도는 희석율0.14hr-1 에서 0.6g dry weight/l/hr이었다. 이러한 조건에서 각종 metabolic paeameter값을 계산하였다. 또한 배양액의 유변학적 특성은 Casson equation에 잘 부합됨을 확인하였고, 배양액의 점도와 산소전달계수를 측정하여 고점도 배양시 산소전달의 장애현상을 조사하였다.

A quantitative physiological approach has been employed to estimate the metabolic parameters such as specific uptake rates of nutrients and specific production rate in continuous culture of Pseudomonas elodea for gellan gum production. The estimated values of metabolic parameters are used for process improvement. During the exponential growth phase, the specific growth rate was 0.16hr-1 in batch culture. The gellan gum concentration increased up to 0.7g dry weight/100g broth and the apparent viscosity of the culture broth was about 4,500 cp.(72hrs culture). The ratio of specific uptake rate of carbon to that of nitrogen were found to be optimum at about 3.0mg-carbon/mg-nitro-gen. With the improved medium, the maximum gellan production rate, 0.6g dry weight/1/hr, was obtained at D=0.14 hr-1. The shear stresses of culture broth were fairly well correlated with shear rates by using Casson equation and at highly viscous culture broth, oxygen transfer coefficient was greatly reduced.

Transgluaminase반응을 이용하여 ATP analog들(C8-ATP[?][?][?]N6-ATP)을 casein에 고정화하였다. 고정화 ATP는 hexokinase에 의해 탈인산화되어 약55%가 ATP형으로 전환되었으며, 이는 acetate kinase에 의해 역으로 인산화되어 약80%가 ATP형으로 전환 되었다. B-Casein은 $a_s_1-casein$에 비하여 glutamine 잔기의 수가 많으며,N6-ATP의 경우 이의 alkyl carbamyl기와 casein의 carboxamide기 간의 정전기적 반발에 원인이 있는 것으로 보인다. ATP는 고정화하므로써 안정성이 증대되었으며, 고정화 ATP의 km치는 유리상의 ATP및 ATP analog의 그것과 비슷하였으나, 최대속도는 감소되었다. 고정하 ATP는 반응액에서 calcium의 첨가로 쉽게 침전되어 용액으로부터 거의 완전히 회수 되므로써, 반응액으로부터의 회수분리가 가능한 이점을 가졌다.

ATP analogs were immobilized or bovine caseins by the action of transglutaminase. The ATP analogs immobilized on the caseins were enzymatically active and interconverten by kinases. The immobilized ATP was dephosphorylated to the corresponding ADP by hexokinase and rephosphorylated to the ATP in solid form by acetate kinase. Under the conditions chosen, about 55% of the immobilized ATP was dephosphorylated and about 80% of the resulted ADP was rephosphorylated. Bovine B-casein was more useful than sf-casein as a carrier and C8-substituted ATP analognwas more effective than N6-substituted one in immobilization. Michaelis constant of C8-substituted ATP analog immobilized on B-casein was similar to that of free form of ATP and that of ATP analog. The immobilized ATP was much more stable than free ATP and its analog, while maximum velocity was reduced to 37% of the free ATP analog. The immobilized ATP was recovered almost completely by calcium precipitation.

고등식물의 형질전환용 유전자운반체로써 가장 많이 사용되고 있는 Ti-plasmid를 이용해서 당근세포를 형질 전환시키기 위한 연구의 일환으로 Agrobacterium spp를 helper로 이용하여 NPT II gene를 함유하고 있는 binary vector GA472를 당근세포에 삽입시켜 kanamycin에 대해 저항성을 나타내는 세포주를 선발하고자 본 연구를 수행하였다. 국내 토양에서 선발한 A.tumefaciens 2종과 disarmes된 PC2760 그리고 hypervirulent균주인 A281에 tri-parental mating 방법에 의해서 binary vector인 pGA472을 도입하여 transconjungants인 A. tumefaciens c-23-1/pGA472,K29-1/pGA472, PC2760/PGA472 그리고 A281/pGA472를 획득하였다. Transconjungants는 plasmid의 분리, 정제방법에 의해서 추출한 후 0.7% agarose gel 상에서 관찰해 본 결과 4균주 공히 NTPII gene이 삽입된 pGA472와 Ti-plasmid를 함유하고 있는 것을 확인 하였다. 확인된 conjugant와 당근정상조직을 동시배양방법에 의해서 형질전환을 유도한 후 정상조직은 전혀 생존이 되지않은 kanamycin에 대해서 저항을 나타내는 callus를 선발할 수 있었다.

These studies were carried out to obtain the transformant from carrot cells by using binary vector pGA472 with NPT II gene to confer kanamycin resistance in the plant cells. The binary vector pGA472 was mobilized from E. coli MC1000 into A. tumefaciens strains isolated in the Korea, C23-1. K29-1, and disarmed Ti-plasmid PC2760, and A28l using a tri-parental mating method with E. coli HB101/pRK2013. Transconjugants, C23-1/pGA472, K29-1/pGA472, PC2 760/pGA472 and A28l/pGA472 were obtaind on the minimum AB media containing tetracycline and kanamycin, were comfirmed to hold the Ti-plasmid and pGA472 binary vector on the 0.7% agarose gel. Transformed carrot calli were initiated on the MS media supplemented with l00/ml kanamycin and 250ug/ml carbenicillin after co-cultivation of carrot explant and transconjugant Agrobacteria. Selected callus was grown vigouousley for subculture on the medium containing 100/ugml kanamycin, thus indication that the selected callus was transformed with NPT II gene.

Astaxanthin을 생산하는 효모 Phaffia rhodozyma로부터 제조된 상보적 돌연변이 균주간의 세포융합을 통하여 astaxanthin을 대량 생산하는 균주를 얻고자 시도하였다. 이들의 원형질체 융합빈도는 $1.3x10^-^5-6.0x10^-^5$이었고 DNA함량, 핵염색, UV조사에 대한 생존력 비교 그리고 형질분리분석등으로 핵융합을 확인하였다. 융합체 중 F1은 야생형의 모 균주와 비교했을때 astaxanthin생성량이 약 3배 증가하였다.

Cell fusion between complementary mutants isolated from astaxanthin-producing yeast, Phaffia rhodozyma, was carried out to obtain astaxanthin-overproducing strains by protoplast fusion technique. The frequency of protoplast fusion was ranged from 2.310-5 to 6.010-5, and nuclear fusion in the cells of hybrids was demonstrated by several techniques such as isolation of recombinants after mitotic segregation of parental genetic markers, estimation of DNA content, direct observation of nuclei with nuclear staining, and comparison of survival rate to UV exposure. One of several hybrids, Fl, showed approximately 3-fold increase in astaxanthin content when compared with wild parent.

인삼의 조직에 Agrobacterium rhizogenes strain 15834와 A4을 감염하여 형질전화체를 얻었다. 이는 인삼에서처럼 무균식물을 얻기어려운 경우 leaf disk 방법으로 모상근을 유도할 수 있었다. 모상근의 ginsenoside(Rg2,Rg1,Rf,Rd,Rc,Rbl, and Rb2)는 HPLC에 의해 定量하였으며, 진탕배양한 모상근의 ginsenoside의 함량은 0.34-1.19% 건량이었다. 이러한 결과는 재배 인삼과 배양 인삼의 ginsenoside의 함량에 비해 좋은 성과라고 사료된다

New methods have been developed to transform Panax ginseng with Ri plasmids of Agrobacterium rhizogenes 15834 and A. rhizogenes A4. Modified leaf disc method was made feasible to establish hairy root culture even when an axonic plantlet was not available as in the case of P. ginseng. The contents of ginsenosides (Rgl, Rf, Rc, Rbl, and Rb2) in hairy roots. were determined by HPLC. Hairy root cultures, established as liquid culture in MS medium, was produced 0.34~1.19% ginsenosides on dry weight basis, and this result is significantly higher level than that of normal P. ginseng.

메탄올이용균인 Methylobacillus sp. SKI의 균체생산효율을 증대시킬 목적으로 마이크로컴퓨터 제어 배양기를 이용해 고농도 유가배양을 수행하였다. 배양액의 초기 메탄올농도를 1.0%(v/v)로 하여 회분배양할 경우 배양 13시간만에 2.07g/l의 균체농도에 도달하였다. 공기 공급에 의한 유가배양에서 최대교반속도 1200rpm, 최대 공기유량 5.0ℓ/min의 조건으로 배양시 약 15시간만에 13.7ℓ/ldml 균체농도에 도달하였다. 산소공급에 의한 유가배양에서 최대교반속도 1200rpm, 공기유량 1.0ℓmin, 최대산소유량 5.0ℓ/min의 조건으로 배양시 17시간만에 45.3g/l의 균체농도에 도달하였다. 균의 대수 증식기를 공기공급에 의한 유가 배양으로 회분배양에 비해 약 3시간, 산소공급에 의한 유가배양으로 회분배야에비해 약 3시간, 산소공급에 의한 유가배양으로 회분배양에 비해 약 4시간 더 연장할 수 있었다. 즉, 유가배양로 단시간에 높은 농도의 균체를 얻은 것은 feedback제어에 의해 메탄올을 저해농도 이하로 유지시키면서 용존산소를 한계농도 이상으로 제어함으로써 균의 대수적 증식으로 연장시킨 결과이다. 산소공급에 의한 유가배양중 균체농도 27.6g/l에서 미량원소성분이 결핍되었고, 42.8g/l에서 Mg2+성분이 결핍되었으므로 배양중에 추가공급되었다

Methylobacillus sp. SK1, an obligate methylotroph, was cultivated in a fed-batch culture using DO as a methanol feeding indicator with a micro computer-aided control system. While 2.07g/l of cell density was obtained after 13 hr in the batch culture (initial methanol concentration: 1.0%(v/v)),45.3g/l of cell density was obtained after 17 hr by feeding methanol and metal ions in the fed-batch culture with oxygen supply. The high-density biomass was obtained in short cultuivation time by fed-batch culture with feedback control, and consequently the biomass productivity was significantly increased. It was mainly due to extension of logarithmic growth period by methanol feeding without methanol inhibition and intensive aeration without DO limitation with microcomputer-aided control system.

Chitin을 35 mesh로 분쇄하여 강산과 강알카리로 처리하여 CHITA와 CHITB를 만들고 여기에 glutaraldehyde를 작용시켜 B-glucosidase를 고정하여 CHITA-Gase 및 CHITB-Gase를 제조하였다. 이 두 종류의 고정화 효소를 기질 p-nitropheol-B-D-gliucopyranoside(PNG)과 회분식 반응기, 연속 흐름 반응기 및 플러그 흐름 반응기에서 반응시켜 최적 온도, 최적 pH, 반응 속도 상수, 물질 전달 계수, 효율 인자 및 효소 불활성화 속도 등을 구하여 반응기별 효율을 검토하였다. 반응 최적 온도는 세가지의 반응기 모두 5였으며, 최적 pH는 플러그 흐름 반응기에서는 Nat-Gase와 같이 pH5.0이었고 회분식 반응기 및 연속 흐름 반응기에서는 최적 pH의 이동이 일어나 pH6.0으로 이었다. 반응기의 최적 조건에서 km값은 회분식 반응기에서 CHITB-Gase$1.72510^-^5M/1$가 CHITA-Gase($1.72510^-^5M/1$)보다 작았으며, 연속 흐름 반응기 및 플러그 흐름 반응기에서는 유속 증가에 따라 Km'치가 감소하는 경향을 보였고, CHITB-Gase가 CHITB-Gase보다 더 작았다. $Vmax값은 회분식 반응기, 연속 흐름 반응기, 플러그 흐름 반응기에서 모두 CHITA-Gase가 CHITB-Gase보다 높은 것으로 나타났다. 그리고, 물질전달계수 및 효율인자, 효소 불활성화 속도등의 값은 환경은 CHITB-Gase의 것이 나은 것으로 나타났다. 이들의 결과에서 CHITA-Gase 및 CHITB-Gase는 기질과의 반응 환경이 좋으므로 chitind은 B-glucosidase의 좋은 지지체라고 판단되어 공업적 응용이 기대된다.

Partial hydrolysed and deacetylated chitin, CHITA and CHITB as supports of immobilized enzyme were obtained by treatment of acid and base respectively. Glutaraldehyde, bifunctional reagent, was employed for crosslinking between B-glucosidase and support. Immobilized enzyme activities of CHITA-Gase and CHITB-Gase were determined with the reaction of p-nitrophenol-B-D-glucopyranoside(PNG) in batch reactor, CSTR and PFR. Their optimum temperature, pH and enzymatic characteristics including Km and Vmax values were observed with variation of the flow rates. Mass transfer coefficient(h), effectiveness factor(η), deactivation rate(kd ) of two immobilized enzymes were also examined to compare efficiency of reactors.

대장균의 lipoprotein promoter, lac UV5 promoter 및 operator와 lipoprotein의 signal sequence를 가지는 vector에 alpha-IFN유전자를 cloning함으로써 제작된 plasmid plF-III-B와 plF-III-C를 여러종류의 대장균 숙주 세포에 형질 전환하여 IFN의 생산성을 조사해 본 결과 lpp-형질을 가지는 JE5505가 가장 우수했으며, 기존 plasmid, Hif-2h에 비해 130배 높은 생산성을 보였다. 또한 생산된 IFN의 약 50%가 세포 외부로 분비됨을 확인하였다.

Alpha-interferon was produced by using recombinant Escherichia coli strains, which carry cloned alpha-interferon gene in plasmid vectors, pIF-III-B and pIF-III-C. With the aid of signal sequence of E. coli lipoprotein, which is placed right in front of the upstream of the cloned alpha-interferon gene of the plasmids, about 50% of alpha-interferon produced was excreted or secreted. Meanwhile, there was no extracellular production of alpha-interferon from the recombinant strain carrying the plasmid Hif-2h that lacks the signal sequence of lipoprotein.

대장균과 코리네형 세균간의 shutle vector pECCGI과 pECCD2를 제작하고, plasmid pECCGI과 glycine배지에서 다양한 Corynebacterium glutamicum을 사용하여 전기장 충격법에 의한 형질전환에 있어서 여러 조건을 조사한 결과 세포 현탁액 40ul와 DNA 2ul의 혼합액 사용시 저항 600 obms, 전기장의 세기 12.5kv/cm, DNA양 10ng, 세포수 $4.510^8$와 세포회수 시기를 1.0이하의 A600으로 했을때 106 transformants/ug of DNA의 형질전환 효율을 보였다

Escherkchla coli/Cownebacterium glutamicum shuttle vectors, pECCGl and pECCG2 were constructed by joining a 3.0 kb C. glutamicum cryptic plasmid pCBl and a 3.94 kb E. coli plasmid pACYC177. Using the plasmid pECCGl, various parameters involved in electroporation system including electric field strength, resistance, DNA concentration, cell concentration and growth stage were investigated independently and optimized for the high efficiency transformation of coryneform bacteria. Transformation efficiencies of 106 transformants/ug of plasmid DNA were achieved with Corynebacterium glutamicum.

배양기와 16비트 마이크로컴퓨터를 접속하여 호기성 미생물의 고농도 유가배양시스템을 구성하였다. 기질공급을 위한 제어변수로는 용존산소(DO)를 이용하였다. 용존산소측정기의 출력신호를 컴퓨터에 입력시켜 측정한 DO값에 근거하여 교반모터의 교반속도와 산소유량을 제어함으로써 배양액의 DO를 일정하게 유지하였으며, 연동펌프의 제어에 의해 기질공급을 안정하게 수행하였다. 기질공급의 제어와 DO의 제어를 한가지의 하아드웨어 및 소프트 웨어로 수행할 수 있었다. 제어시스템을 이용하여 메탄올이용균인 Methylobacillus sp. SKI을 유가배양한 결과 배양액의 DO제어와 메탄올 공급의 제어가 무리없이 수행되었으며, 배양 10시간만에 16.53g/l의 균체농도에 도달하였다

A microcomputer-aided fermentation system was constructed for high density fed-batch culture using dissolved oxygen(DO) as a substrate feeding indicator. DO signal was processed prior to aquisition to computer. Agitation speed and oxygen flow rate was changed stepwisely to maintain DO value at a constant level. Agitation speed was controlled by the output signal of D/A converter. Oxygen flow rate was controlled by a flow rate control valve connected to a stepping motor. Substrate was fed with a feeding pump operated by the abrupt increase of DO signal. Methylobacillus sp. SK1 was cultivated to test the system and 16.53g/l of cell density was obtained after 10 hr.