Earticle

초록

영어

These studies were carried out to obtain the transformant from carrot cells by using binary vector pGA472 with NPT II gene to confer kanamycin resistance in the plant cells. The binary vector pGA472 was mobilized from E. coli MC1000 into A. tumefaciens strains isolated in the Korea, C23-1. K29-1, and disarmed Ti-plasmid PC2760, and A28l using a tri-parental mating method with E. coli HB101/pRK2013. Transconjugants, C23-1/pGA472, K29-1/pGA472, PC2 760/pGA472 and A28l/pGA472 were obtaind on the minimum AB media containing tetracycline and kanamycin, were comfirmed to hold the Ti-plasmid and pGA472 binary vector on the 0.7% agarose gel. Transformed carrot calli were initiated on the MS media supplemented with l00/ml kanamycin and 250ug/ml carbenicillin after co-cultivation of carrot explant and transconjugant Agrobacteria. Selected callus was grown vigouousley for subculture on the medium containing 100/ugml kanamycin, thus indication that the selected callus was transformed with NPT II gene.

한국어

고등식물의 형질전환용 유전자운반체로써 가장 많이 사용되고 있는 Ti-plasmid를 이용해서 당근세포를 형질 전환시키기 위한 연구의 일환으로 Agrobacterium spp를 helper로 이용하여 NPT II gene를 함유하고 있는 binary vector GA472를 당근세포에 삽입시켜 kanamycin에 대해 저항성을 나타내는 세포주를 선발하고자 본 연구를 수행하였다. 국내 토양에서 선발한 A.tumefaciens 2종과 disarmes된 PC2760 그리고 hypervirulent균주인 A281에 tri-parental mating 방법에 의해서 binary vector인 pGA472을 도입하여 transconjungants인 A. tumefaciens c-23-1/pGA472,K29-1/pGA472, PC2760/PGA472 그리고 A281/pGA472를 획득하였다. Transconjungants는 plasmid의 분리, 정제방법에 의해서 추출한 후 0.7% agarose gel 상에서 관찰해 본 결과 4균주 공히 NTPII gene이 삽입된 pGA472와 Ti-plasmid를 함유하고 있는 것을 확인 하였다. 확인된 conjugant와 당근정상조직을 동시배양방법에 의해서 형질전환을 유도한 후 정상조직은 전혀 생존이 되지않은 kanamycin에 대해서 저항을 나타내는 callus를 선발할 수 있었다.

목차

ABSTRACT
 서론
 재료 및 방법
  사용균주 및 binary vector
  Agobacterium tumefaciens에 의한 당근조직의 tumor 형성능 확인
  Tri-Parental mating 방법에 의한 binary vector 의 Agobacterium
  Transconiugant로 부터 Ti-Plasmid 및 binary Vector 존재여부 확인
  당근조직의 kanamycin에 대한 반응조사
  NPT II gone의 당근세포내로 도입 및 형질전환 세포의 증식
 결과 및 고찰
  당근절편을 이용한 tumor의 형성
  선발 Agrobacterium SPP.에 binary vector system의 도입 및 확인
  Binary vector system도입에 의한 당근세포의 형질전환
 감사
 요약
 참고문헌

저자

• 양덕조 [ Deok-Cho Yang | 충북대학교 생물학과 ]
• 이성택 [ Sung-Taick Lee | 한국과학기술원 생물공학과 ]

참고문헌

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• 간행물명

  KSBB Journal

• 간기

  격월간

• pISSN

  1225-7117

• 수록기간

  2009~2013

• 십진분류

  KDC 476 DDC 576