Earticle

초록

영어

Trigonopsis variabilis is a strong producer of D-amino acid oxidase that can transform cephalosporin C(ceph C) to -keto-adipyl-7-aminocephalosporanic acid(AKA-7ACA). Polymerase chain reaction (PCR) was applied to isolate the D-AAO gene from T. variabilis. To clone the PCR fragment, four different methods were examined using enzymatic reactions of Taq DNA polymerase, Klenow, T4 DNA polymerase I, Alkaline phosphatase Calf Intestinal, and T4 kinase. Ligation of phosphorylated blunt-end PCR fragment and dephosphorylated blunt-end of pUC18 plasmid yielded the best cloning efficiency One of recombinant E. coli transformants showed D-AAO activity against ceph C in both cell extracts and permeabilized cells.

한국어

Trigonopsis variabilis는 버l타락탐 항생제인 cephalosporin C (ceph C)를 -keto-adipyl-7 a aminocephalosporanic acid(AKA-7 ACA)로 생변 환하는 강력한 D-amino acid oxidase 효소를 갖고 있다. 본 연구는 이 D-AAO 효소의 유전자를 추출하기 위하여 polymerase chain reaction (PCR)을 사용하였다. PCR 단편을 콜로닝하기 위하여 Taq D DNA polymerase, Klenow, T4 DNA polymerase I, Alkaline phosphatase Calf Intestinal와 T4 kinase 의 효소반응을 이용하여 4가지의 방법을 샤용한 결 과, blunt - end 의 PCR fragment 를 phosphory­l lation하고 blunt -end의 pUC18 plasmid를 dephos phorylation 한 후 ligation 한 것 이 가장 좋은 클로 닝 효율을 보였다. Ceph C에 대한 D-AAO 효소의 활성은 재조합 E. coli의 세포추출액과 permea bilized cells에서 모두 확인할 수 있었다.

목차

ABSTRACT
 서론
 재료 및 방법
  사용균주와 Plasmid
  PCR 반응조건
  세포추출액 조제
  D-AAO 효소활성 측정
 결과 및 고찰
  PCR 단편의 클로닝
  D-AAO 유전자의 확인
  D-AAO 활성 측정
 요약
 감사
 참고문헌

저자

• 이진형 [ Jin-Hyung Lee | 영남대학교 생화학과 ]
• 정태완 [ Taeowon Chung | 영남대학교 생화학과 ]
• 곽성근 [ Sung-Gon Kwak | 영남대학교 공업화학과 ]
• 임동준 [ Dong-Joon Lim | 영남대학교 공업화학과 ]
• 윤철식 [ Cheol-Sik Yoon | 한국과학기술연구원 생명공학연구소 ]
• 이상기 [ Sang-Ki Rhee | 한국과학기술연구원 생명공학연구소 ]
• 강용호 [ Yong-Ho Khang | 영남대학교 응용미생물학과 ] Corresponding Author

참고문헌

발행기관

간행물

표지보기 관심저널 등록

• 간행물명

  KSBB Journal

• 간기

  격월간

• pISSN

  1225-7117

• 수록기간

  2009~2013

• 십진분류

  KDC 476 DDC 576