Earticle

본 연구는 소의 초기 난할 단계인 2 또는 4세포기 수정란의 특정 분할구가 배반포 단계의 내부 세포괴(Inner Cell Mass) 와 영양막 세포(Trophectoderm cells)로의 발달 운명이 미리 정해지는 지를 확인하기 위해 실시되었다. 먼저 생쥐의 체내 수정란과 소의 체외 수정란에서 배반포의 영양막 세포에서만 특이적으로 발현하는 cdx2 단백질의 발현 양상을 조사하였다. 또한, 소의 경우 2세포기와 4세포기가 내부 세포괴와 영양막 세포로 나눠지는 시점인지를 조사하기 위해 2 또는 4세포기의 특정 분할구에Dextran의 주입 실험과 분할구 제거 실험을 통해 ICM과 TE 형성을 확인하였다. cdx2의 발현 경향은 생쥐와 소의 2세포기일 때 대칭과 비대칭적으로 발현되는 것을 확인하였다. 생쥐의 4, 8세포기 및 상실배기에서는 분할구 전체에서 발현되었으나, 소 수정란의 분할구에서는 전체 또는 부분적으로 발현되었다. 또한, 생쥐와 소의 배반포기에서는 영양막 세포에서만 발현이 되는 것을 확인하였다. 소 수정란의 2세포기와 4세포기 단계에서 특정 분할구에 주입된 Dextran은 배반포의 내부 세포괴와 영양막 세포의 양쪽에 분포된 것을 관찰할 수 있었다. 2세포기 단계에서 하나의 분할구가 제거된 수정란 역시 ICM 및 TE 세포를 지닌 정상 배반포로 발달함을 확인하였다. 따라서 본 연구 결과는 영양막 세포에서만 특이적으로 발현하는 cdx2의 발현이 2 또는 4세포기 단계 소 수정란에서는 특별한 차이를 보이지 않으며, 궁극적으로 난할 초기에는 ICM과 TE 세포로의 운명이 결정되지 않는다는 것을 보여준다.

The present study was examined the expression patterns of cdx2 gene, TE lineage marker, in the mouse and bovine developmental stage embryos and whether one blastomere of two- and/or four-cell bovine embryos develop to specific lineage (ICM or TE) of blastocyst by injection of Texas red conjugated dextran as a lineage tracer. It was also investigated the allocation of ICM and TE cells in bovine blastocysts derived from one blastomere of two- and/or four-cell stage embryos. Firstly, it was observed that expression of cdx2 appeared symmetric and asymmetric distribution at the two-cell stage mouse embryos. From four-cell to morula stage mouse embryos, the expression of cdx2 gene was observed in almost all blastomeres. In case of bovine embryos, localization of cdx2 was similar to pattern of mouse embryos. The Dextran-labeled blastomere of two- and/or four-cell embryos contributed to both ICM and TE cells in bovine blastocysts. And also, it was confirmed that a single blastomere derived from two-cell stage bovine embryos could develop to the normal blastocyst with both ICM and TE cells. These results show that two-and/or four-cell stage is not the specific stage to determine the cell fate for ICM and TE, and which is not correlated with the expression of cdx2 gene.

본 연구의 목적은 inbred 마우스 (C57BL/6J)의 수정란을 이용하여 형질전환마우스를 생산할 때, 수정란이식의 효율성을 증진시키기 위한 것이다. C57BL/6J 및 BCF1 마우스로부터 과배란처리 방법에 의해 수정란을 얻고, DNA를 1 세포기 수정란에 미세 주입한 다음, 1세포기 또는 2 세포기의 수정란을 가임신된 마우스의 한쪽 또는 양쪽 난관에 각각 이식하였다. 1세포기의 수정란을 0.75 d.p.c. 가임신된 마우스의 한쪽 난관에 이식했을 때, 임신율이 C57BL/6J는 68.8±7.83%, BCF1은 48.3±14.22% 이었고, 이식한 수정란 당 산자의 발달율은 C57BL/6J가 11.9±5.51%, BCF1은 10.5±8.03%로 성적이 저조하였다. 그러나, 2세포기의 수정란을 0.5 d.p.c. 가임신된 마우스의 양쪽 난관에 이식했을 때, 임신율이 C57BL/6J는 94.4±9.64%, 13CFl은 100±0% 이었고, 이식한 수정란 당 산자의 발달율은 C57BL/6J가 22.1 ±0.4%, BCF1은 21.8±0.38%였다. 따라서 C57BL/6J 마우스의 2세포기 수정란을 0.5 d.p.c. 가임신된 마우스의 양쪽 난관에 이식하는 것이, BCF1마우스와 유사한 성적을 얻어 경쟁력이 있는 것으로 판단되었다. 이러한 결과에 영향을 미치는 인자가 여러 가지 있을 것으로 판단되지만, C57BL/6J 마우스의 2세포기 수정란을 0.5 d.p.c.가임신된 마우스의 양쪽 난관에 이식하는 방법이 다른 방법보다 형질전환마우스를 생산하는데 효율성이 더 높은 것으로 본 실험에서 확인되었다.

The objective of this study is to improve the efficiency of embryo transfer in generation of transgenic mice using inbred mouse (C57BL/6J) embryos. The embryos of C57BL/6J and BCF1 mice were superovulated by the standard protocol. One-cell stage of embryos were microinjected and the resulted one-or two-cell were transferred into one-or two-side oviducts of foster mother, respectively. When one-cell stage of embryos were transferred into one-side oviduct of 0.75 d.p.c. foster mother, the results were not ideal because of showing pregnancy ratios of 68.8±7.83% for C57BL/6J and 48.3±14.22% for BCF1, and development ratios of pups vs transferred embryos of 11.9±5.51% for C57BL/6J and 10.5±8.03% fur BCF1 . However, when two-cell stage of embryos were transferred into two-side oviducts of 0.5 d.p.c. foster mother, we got better results of 94.4±9.64% and 100±0% pregnancy ratio, and 22.1±0.4% and 21.8±0.38% development ratio for C57BL/6J and BCF1, respectively. Therefore, transferring two-cell stage of C57BL/6J embryos into two-side oviducts of 0.5 d.p.c. foster mother may be competitive to the result in BCF1 embryos. Even if there are a lot of other factors affecting these results, we conclude from these experiments that transfer of two-cell embryos into two-side oviducts of 0.5 d.p.c. foster mother is a more efficient and safe method than others in generating transgenic mice using inbred mice embryos.

텔로미어란 염색체 말단부에 (TTAGGG)n의 반복 염기서열이 단백질과 결합된 형태를 말하는데 이의 역할은 염색체의 안정성에 본질적으로 작용하여 세포의 노화, 사멸 및 암의 발생과 관련이 있다고 알려져 있다. 반면 텔로머레이스는 telomeric DNA 합성에 직접 관여하는 ribonucleoprotein이다. 본 연구에서는 마우스 염색체의 텔로미어 분포 양상을 제시하고, 초기 배 발생단계별 수정란의 텔로미어 함량과 이들 수정란의 텔로머레이스 활성도를 분석하고자 하였다. 본 분석에는 마우스의 섬유아세포, 생식세포, 정자, 난자 및 1세포기, 2세포기, 4세포기, 8세포기, 상실배와 배반포배의 각 단계별 수정란을 대상으로 하였다. 텔로미어의 양적 분석은 human telomeric DNA probe를 이용한 Q-FISH 방법을 이용하였고, 텔로머레이스 활성도는 TRAP 방법을 이용하였다. 분석 결과 마우스 염색체의 텔로미어는 성 염색체를 포함한 모든 염색체의 앙 말단부에 분포되어 있고, 염색체별 다소의 양적 차이를 보이나 대부분의 염색체에서 q-arm 말단이 p-arm 말단에 비해 높은 텔로미어의 함량을 나타내었다. Q-FISH를 이용한 마우스 초기 배 발생단계별 수정란의 텔로미어의 양적 분석에서 수정 직후 1세포기에서부터 상실배까지 거의 비슷한 텔로미어 함유율을 나타내고 있으나 배반포기에서 월등히 증가된 양상을 나타내었다. TRAP 분석을 이용한 초기배아의 텔로머레이스 활성도는 초기 배 발생 모든 단계에서 이의 활성도를 나타내었으며, 특히 상실배 및 배반포기에서 점진적으로 강한 활성을 보였다. 이상의 분석 결과로부터 마우스의 초기 배 분열단계의 각 세포들에 있어 텔로미어의 함유율과 텔로머레이스 활성도는 높은 상관관계가 있는 것으로 나타났다. 따라서 포유동물의 초기 배자에 있어 텔로미어의 함유율과 텔로머레이스 활성도는 배 발생 및 배자의 세포 분화와 매우 밀접한 관련이 있는 것으로 사료되어 텔로미어의 양적 분석 및 텔로머레이스 활성도 분석은 발생학적 연구를 위한 또 다른 좋은 자료로 생각된다.

Telomeres consisting of (TTAGGG)n tandem repeat DNA sequences and associated proteins are essential for chromosome stability and related with cell senescence, apoptosis and cancer. The telomerase is a ribonucleoprotein which act as a template for the synthesis of telomeric DNA. This study was carried out to identify the distribution of telomeres on mouse chromosomes and also to analyze the amount of telomeres and telomerase activity of mouse embryos at early embryonic stages. Germ cells and early embryos from 1 cell to blastocyst stage were analyzed. The amount of telomeres was analyzed by quantitative fluorescence in situ hybridization technique(Q-FISH) using a human telomeric DNA probe, and telomerase activity was measured by telomeric repeat amplification protocol assay(TRAP). In results, the telomeres on mouse chromosomes were distributed at the ends of all autosomes and sex chromosomes. Although the quantity of telomeres varied among chromosomes, most of chromosomes had higher amount in q-arm telomeres than in p-arm telomeres. The results of Q-FISH indicated that the relative amount of telomeres of mouse embryos in each embryonic stage was approximately the same except the higher amount in blastocysts. Using TRAP assay on mouse embryos, telomerase activity was detected in all preimplantation stages from mature oocytes to blastocysts. Especially the telomerase activity was significantly increased at the morula and blastocyst stage. In conclusion, there may be a close association between the amount of telomeres and telomerase activity in early embryonic stages, and analysis of telomere quantity and telomerase activity on early development will be helpful for the investigation of embryogenesis and embryonic cell differentiation in mice.

본 연구는 돼지 미성숙 난자를 체외에서 성숙, 수정시킨 뒤, 체외 수정란의 배양 시 성장인자와 6탄당의 첨가에 따른 체외 발육율을 검토하였다. 체외수정란의 발육을 위한 기본 배양액인 NCSU-23에 각각 0, 1, 5, 10 및 20ng/ml의 IGF-I과 EGF를 각각 첨가하여 농도의 차이에 따른 발육율을 검토하였다. 또한 5.56mM의 glucose, mannose, galactose 및 fructose에 5ng/ml의 IGF-I 또는 10ng/ml의 EGF 첨가 유, 무에 따른 초기배 발육율을 검토하였다. 마지막으로, 각각의 6탄당에 위와 같은 농도의 IGF-I와 ECF 공동 첨가 유, 무에 따른 초기배 발육율을 검토하였다. 그 결과, 돼지 체외 수정란의 체외 발육 시 배양액 내에 서로 다른 농도의 IGF-I과 EGF를 첨가하였을 때 IGF-I은 5ng/ml(12%)에서, EGF는 10ng/m1(10%)의 실험구에서 가장 높은 배반포기 배의 발육율을 나타냈다. (p<0.05) 또한 각각의 6탄당과 IGF-I 또는 EGF 유, 무에 따른 초기배 발육율을 검토한 결과 IGF-I과 ECF모두 glucose 첨가시 타 첨가구에 비해 초기 발육 단계의 수정란 발육뿐만 아니라 배반포까지의 배발육(10∼11%)이 타 첨가구(3∼8%)에 비해 높게 나타났다. (p<0.05) 한편, 각각의 6탄당이 첨가된 배양액 내에 ICF-I과 EGF 공동첨가 유, 무에 따른 초기배 발육율을 검토한 결과 모든 실험구에서 EGF와 IGF-I 첨가 시 무첨가보다 높은 초기배 발육율을 나타냈으며 특히 초기 분열단계 수정란에서는 발육의 차이가 크게 나타났다. 본 연구 결과 성장인자와 6탄당의 첨가는 돼지 수정란의 체외배양 시 초기배 배발육에 효과적인 영향을 미치는 것으로 사료되며, 이는 체외 발육율이 타 가축에 비해 낮은 돼지의 수정란 생산에 있어 체외배양체계의 개선을 위한 기초자료가 될 수 있을 것으로 기대된다.

The aim of this study was to investigate the effects of different hexoses in medium with IGF-I and/or EGF on in vitro development of porcine embryos. In first experiment, when the embryos were cultured in medium with concentrations of 5 ng/ml IGF-I and 10 ng/ml EGF, the morula and blastocyst rates were higher than in another culture conditions (P<0.05). In second experiment, the effect of IGF-I in medium with different hexoses during the embryo culture was examined. The higher cleavage rates were obtained in medium with glucose and IGF-I (P<0.05). However, the higher proportion of embryos developed to morula and blastocyst stages in medium with IGF-I were obtained than in medium without IGF-I in medium with glucose, mannose and galactose. In third experiment, the effect of EGF on in vitro development of porcine embryos in medium with different hexoses were examined. In the culture medium was supplemented with glucose, the higher proportions (P<0.05) of embryos developed to molura and blastocyst stages were obtained in medium with that than without EGF. However, the proportions of embryos developed to blastocyst stage were not significantly different between with and without of EGF in medium with different hexoses. In firth experiment, the effects of presence of IGF-I and EGF in medium with different hexoses on in vitro development of porcine embryos were examined. When culture medium was supplemented with IGF-I and EGF, the higher proportions of oocytes cleaved and developed to 8-cell stage were obtained in medium with glucose than mannose, galactose and fructose (P<0.05). These results show that glucose and growth factors, supported the development in vitro of porcine embryos, especially with greater embryo cleavage and development in medium with glucose added to media with IGF-I and/or EGF.

본 연구는 소 체외수정란과 체세포 복제란의 초자화 동결 및 융해 후 생존능을 검토하였다. 배반포로 발육된 체외수정란 및 체세포 복제란을 초자화 동결법에 의해 동결하였다가 융해하여 생존율 및 배양 후 부화율을 검사하였다. 체외수정란 배반포를 초자화 동결 융해한 결과, 확장배반포가 배반포기 난자에 비하여 생존율(82.1%, 96/117)과 부화율(64.1%, 75/117)에서 모두 유의적으로 높았다(p<0.05). 핵이식 배반포 복제란을 초자화 동결 융해한 경우도 체외수정란과 비슷한 경향을 보여 확장 및 부화배의 생존율과 부화율이 각각 81.1%(30/37)와 78.3%(29/37)로, 배반포(각각 71.8 및 53.8%)에 비하여 다소 높게 나타났다. 본 연구의 결과는 초자화 동결 방법에 의해서 소 체외수정란과 체세포 복제란을 성공적으로 동결할 수 있으며, 특히 후기 배반포기 단계에서 초자화 동결 시 높은 생존율과 부화배 형성율을 얻을 수 있음을 보여준다.

This study was conducted to examine the development of in vitro fertilized (IVF) and nuclear transfer (NT) embryos following vitrification. IVF and NT embryos developed to the blastocyst stage were equilibrated by 3 steps, vitrified and thawed, and their survival and hatching rates were examined. In IVF embryos, higher survival (82.1%, 96/117) and hatching rates (64.1%, 75/117) were obtained respectively after thawing and culture in expanded blastocysts compared to blastocysts (p<0.05). High survival and hatching rates were also obtained by vitrification of NT blastocysts, especially in expanded and hatching blastocysts (81.1 and 78.3%, respectively). The result of this study shows that IVF and NT blastocysts, especially late stage blastocysts, are successfully cryopreserved by vitrification.

본 연구는 돼지의 난포란을 체외에서 성숙, 수정시킨 체외수정란의 체외배양 체계를 확립하고 그 기작을 규명하기 위하여 체외배양액에 항산화제인 melatonin의 첨가 및 melatonin과 sodium nitroprusside(SNP)의 첨가배양이 체외수정란의 체외발육에 미치는 영향을 검토하고자 실시하였다. NCSU 23 배양액에 melatonin을 0, 1, 5 및 10nM을 첨가하여 체외배양을 실시한 결과, 배반포기까지 발육율은 17.8%, 26.1%, 20.0% 및 16.3%로서 melatonin 1nM 첨가구가 여타구에 비해 통계적으로 유의하게 높은 성적을 나타냈으며(P<0.05), 상실배기 이상 발육 성적에서도 melatonin 1 nM 첨가구가 39.1%로서 대조구 33.3%, 5 nM 첨가구의 33.3% 및 10 nM 첨가구의 27.9%보다 높은 발육율을 나타냈다(P<0.05). NCSU 23 배양액에 SNP를 0, 50 및 100 μM을 첨가하여 체외 배양한 결과, 상실배 이상 발육성적은 각각 41.9%, 25.6% 및 28.4%로서 SNP 첨가구가 대조구보다 유의적으로 낮은 성적을 나타내었다(P<0.05). NCSU 23 배양액에 대조구, SNP 50 μM, SNP 50 μM에 melatonin 1, 5 및 10nM을 혼합첨가하여 체외 발육율을 조사한 결과, 배반포기 발육율은 각각 2.5%, 1.2%, 9.9％, 5.1% 및 3.7%로서 SNP 50μM + Mel. 1nM 첨가구가 여타구 보다 높은 성적을 나타냈으며, 상실배기 이상 체외 발육율은 31.3%, 34.1%, 39.5%, 29.4% 및 39.5%로서 SNP 50μM + Mel. 1 nM 첨가구와 SNP 50 μM + Mel. 10 nM 첨가구가 여타구보다 높은 발육율을 나타냈다. 모든 처리구에서 배반포까지 발육된 체외수정란의 세포수는 커다란 차이가 인정되지 않았다.

The objective of this study was performed to establish the in vitro culture system of porcine in vitro maturation and in vitro fertilization(IVM/IVF) embryo. These studies was to determine the effects of melatonin, nitric oxide donor(SNP), and the combination effects of SNP and melatonin in porcine IVM/IVF embryos. In routine porcine IVM/IVF procedure, oocytes were cultured for 40∼44h incubation, and the zygotes were cultured for 40∼44h in NCSU 23 medium. Then 2 to 8 cell embryos were removed cumulus cell and were allotted randomly to NCSU 23 containing different concentration of melatonin, SNP and SNP plus melatonin in 5% O₂, 5% CO₂ and 90% N₂ at 38.5℃. Cell numbers of blastocyst were also counted using double fluorescence stain method. In NCSU 23 medium treated with melatonin 0, 1, 5 and 10 nM, the developmental rate of morula plus blastocysts were 33.3%, 39.1%, 33.3% and 27.9%, respectivly. This result show that the developmental rate of morula and blascytocys treated with 1 nM melatonin was higher than in any other groups(P<0.05). The developmental rates of morula plus blastocysts were 41.9% in 0 uM SNP, 25.6% in 50 uM and 28.4% in 100 uM, respectively. The developmental rate of morula plus blastocysts were decreased treated with SNP in NCSU 23. In combined effects of SNP plus melatonin (0, SNP 50 uM, SNP 50 uM plus melatonin 1 nM, SNP 50 uM plus melatonin 5 nM and SNP 50 uM plus melatonin 10 nM), the developmental rates beyond morula stage of porcine embryos were 31.3%, 34.1%, 39.5%, 29.4% and 39.5%, respectively. The addition of SNP 50 uM plus maltonin 1 nM, developmental rates of blastocyst was higher rate than in any other groups. Cell numbers of blastocyst in NCSU 23 treated with melatonin 0, 1, 5 and 10 nM were 41.0, 42.6, 39.6 and 33.0, respectively. In combined effects of SNP plus melatonin (0, SNP 50 uM, SNP 50 uM plus melatonin 1 nM , SNP 50 uM plus melatonin 5 nM and SNP 50 uM plus melatonin 10 nM), cell numbers of developed blastocyst were 36.3, 34.6, 39.0, 39.9 and 39.0, respectively. These result show that the cell numbers of blastocyst treated with 0, 1 and 5 nM melatonin were higher than in 10 nM group(P<0.05), but cell numbers of blatocyst produced by SNP plus melatonin were not significantly difference in all experimental groups.

인간의 불임을 극복하기 위한 번식공학 기술의 효율성을 증가시키기 위해 성세포의 동결이 널리 수행되고 있으나 동결 기술의 효율성에 있어서 논란의 여지가 있다. 본 연구에서는 체외수정란을 생산하기 위한 난자세포질내 정자미세주입(ICSI) 시술에 사용되는 정자와 이들 기술을 이용 생산한 체외수정란의 동결이 배 발생 및 임신에 미치는 효과를 조사하였다. ICSI방법으로 체외수정란을 생산하는 경우 정자의 동결이 체외수정, 발생 및 임신에 영향을 미치지 않았으며, 특히 동결융해한 사출 및 정소정자에 의한 체외수정율과 발생율 및 임신율도 차이가 없었다. 한편 체외수정란을 동결하는 경우 완만동결과 초자화동결에 의한 체외수정란의 생존율과 임신율은 차이가 없었으나, 동결수정란은 신선수정란에 비하여 임신율이 유의하게 낮았다(p<0.05). 결론적으로 ICSI에 사용되는 정자와 달리 ICSI에 의해 생산된 수정란을 동결하는 경우 임신율을 저하시킬 수 있다.

The cryopreservation of germ cells, sperm and embryos, has been largely used to increase the effect of artificial reproductive techniques for human infertility, but the efficiency of germ cell cryopreservation has been conkoversial till now. Thus, the effect of the cryopreservation of human sperm used for ICSI and the effect of the cryopreservation of embryos produced by ICSI on fertilizatiof development and pregnancy were investigated. Sperm freezing did not affect fertilizatiort development and pregnancy rates. Also, there was no significant difference between ejaculated and testicular sperm in ferclizatiort development and pregnancy. Embryo freezing methods, slow freezing and vitrificatior did not differ each other in viability and pregnncy rates. However, ICSI embryo freezing significantly decreased pregnancy rate compared to fresh embryos freezing (p<0.05). In conclusiof this result suggested that cryopreservation of sperm for ICSI did not affect on the resulted embryo development and pregnancy, but ICSI embryo cryopreservation would significantly inhibit pregnancy.

Techniques to evaluate gene expression profiling, such as sufficiently sensitive cDNA microarrays or real-time quantitative PCR, are efficient methods for monitoring human pluripotent stem cell (hESC/iPSC) cultures. However, most of these high-throughput tests have a limited use due to high cost, extended turn-around time, and the involvement of highly specialized technical expertise. Hence, there is an urgency of rapid, cost-effective, robust, yet sensitive method development for routine screening of hESCs/hiPSCs. A critical requirement in hESC/hiPSC cultures is to maintain a uniform undifferentiated state and to determine their differentiation capacity by showing the expression of gene markers representing all three germ layers, including ectoderm, mesoderm, and endoderm. To quantify the modulation of gene expression in hESCs/hiPSC during their propagation, expansion, and differentiation via embryoid body (EB) formation, we developed a simple, rapid, inexpensive, and definitive multimarker, semiquantitative multiplex RT-PCR platform technology. Among the 9 gene primers tested, 5 were pluripotent markers comprising set 1, and 3 lineage-specific markers were combined as set 2, respectively. We found that these 2 sets were not only effective in determining the relative differentiation in hESCs/hiPSCs, but were easily reproducible. In this study, we used the hES/hiPS cell lines to standardize the technique. This multiplex RT-PCR assay is flexible and, by selecting appropriate reporter genes, can be designed for characterization of different hESC/hiPSC lines during routine maintenance and directed differentiation.

체외 성숙시킨 M II기 난자의 여러 화학물질간의 중복 및 병용처리를 실시하여 수핵란으로서 적합한 활성화 조건과 활성화 후 자체 탈핵을 유도함으로써 보다 효율적인 탈핵 여건을 확립하고자 본 연구를 실시하였다. 1. Ethanol을 사용하여 6-DMAP 또는 cycloheximide 간의 단독, 중복, 그리고 병용처리를 실시한 결과, 활성화율, 난할율 및 체외 발달율에서 단독처리와 병용처리간의 차이는 없었으나 중복처리시 유의적으로 저하되었다(P<0.05). 2. Ca/sup 2+/ ionophore를 가지고 활성화 조건별로 처리하였을 경우, 6-DMAP와 병용 처리가 활성화율, 난할율 및 체외 발달율에서 각각 80.8%, 78.3%, 40.6%로 단독처리시의 58.0%, 62.9%, 27.0%보다 유의적으로 높았고(P<0.05), 또한 cycloheximide와의 병용처리도 활성화 및 난할율에서 단독처리와의 유의적 차이를 보였다(P<0.05). 그러나 중복처리시에는 효과를 나타내지 못하였다. 3. 탈핵전 수핵란에 미리 활성화 처리를 한 후 핵이식란을 재구성 한 결과 탈핵율 및 세포 융합율에서 90.7%, 71.8%로 활성화 처리하지 않은 것 77.8%, 61.1% 보다 유의적으로 높았다(P<0.05). 그러나 난할율 및 체외 발달율에서는 유의적으로 저하되었다(38.7%, 19.3% vs 68.8%, 30.6%, P<0.05). 또한 변성율도 활성화 처리하지 않은 구에 비해 유의적으로 높게 나타났다(P<0.05). 이상의 결과로 미루어 탈핵전 활성화하여 수핵란으로 이용할 경우 Ca/sup 2+/ ionophore와 6-DMAP를 병용 처리가 가장 효과적이며, 주입되는 체세포와 수핵란 간의 적정한 세포주기의 조절이 효율적인 돼지 복제수정란 생산을 위해 필요할 것이다.

This study was carried out to improve of enucleation efficiency on porcine recipient oocytes preactivated. In ethanol or Ca/sup 2+/ ionophore, effect of repeating and combinational activation with 6-DMAP or cycloheximide compared with alone activated treatment. Recipient oocytes''''s activation by Ca/sup 2+/ ionophore combined with 6-DMAP or cycloheximide were significantly higher than alone treatment(P<0.05). Between repeating and alone treatments were not significantly different. In ethanol, repeating treatment was significantly lower than alone(P<0.05), and combination treatments were not significantly different. On the basis of these results, efficiency of enucleation, electrical fusion and in vitro development compared preactivated with non-preactivated recipient oocytes. Enucleation and fusion rates of preactivated oocytes were improved significantly compared with non-preactivated oocytes(90.7%, 71.8 vs 77.8%, 61.1%; P<0.05). Behind the back, cleavage and in vitro development rates were significantly lower than non-preactivated oocytes(38.7%, 19.3% vs 68.8%, 30.6%; P<0.05).