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다중 역전사 중합효소 연쇄 반응(Multiplex RT-PCR)을 이용한 인간배아 줄기세포 및 유도만능 줄기세포의 효과적인 분화 양상 조사
Effective Application of Multiplex RT-PCR for Characterization of Human Embryonic Stem Cells/ Induced Pluripotent Stem Cells

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  • 발행기관
    한국동물생명공학회(구 한국동물번식학회) 바로가기
  • 간행물
    Reproductive & developmental biology 바로가기
  • 통권
    Volume 35 No 1 (2011.03)바로가기
  • 페이지
    pp.1-8
  • 저자
    김정모, 조윤정, 손온주, 홍기성, 정형민
  • 언어
    한국어(KOR)
  • URL
    https://www.earticle.net/Article/A140421

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원문정보

초록

영어
Techniques to evaluate gene expression profiling, such as sufficiently sensitive cDNA microarrays or real-time quantitative PCR, are efficient methods for monitoring human pluripotent stem cell (hESC/iPSC) cultures. However, most of these high-throughput tests have a limited use due to high cost, extended turn-around time, and the involvement of highly specialized technical expertise. Hence, there is an urgency of rapid, cost-effective, robust, yet sensitive method development for routine screening of hESCs/hiPSCs. A critical requirement in hESC/hiPSC cultures is to maintain a uniform undifferentiated state and to determine their differentiation capacity by showing the expression of gene markers representing all three germ layers, including ectoderm, mesoderm, and endoderm. To quantify the modulation of gene expression in hESCs/hiPSC during their propagation, expansion, and differentiation via embryoid body (EB) formation, we developed a simple, rapid, inexpensive, and definitive multimarker, semiquantitative multiplex RT-PCR platform technology. Among the 9 gene primers tested, 5 were pluripotent markers comprising set 1, and 3 lineage-specific markers were combined as set 2, respectively. We found that these 2 sets were not only effective in determining the relative differentiation in hESCs/hiPSCs, but were easily reproducible. In this study, we used the hES/hiPS cell lines to standardize the technique. This multiplex RT-PCR assay is flexible and, by selecting appropriate reporter genes, can be designed for characterization of different hESC/hiPSC lines during routine maintenance and directed differentiation.

목차

ABSTRACT
 서론
 재료 및 방법
  인간 배아줄기세포(Human Embryonic Stem Cells: hESCs)와 유도만능 줄기세포(Induced Pluripotent Stem Cells:hiPSCs)의 배양
  배상체(Embryoid Body) 형성
  세포 배양(Cell Culture)
  미분화 인간 배아줄기세포와 역분화줄기세포의 알칼라인포스파테이즈(AP) 염색
  세포의 관찰
  RNA 추출과 cDNA 합성
 결과
  실험에 시용된 세포들의 특성 확인
  다중 역전사 중합연쇄 반응을 통해 단일 프라이머와 다중 프라이머의 제작 확인
  다중 역전사 중합연쇄 반응을 통해 인간 배아줄기세포와 유도만능 줄기세포의 단일 콜로니로부터 미분화 유전자 발현확인
  다중 역전사 중합연쇄 반응을 통해 인간배아 줄기세포로부터 분화된 세포로부터 삼배엽 분화 유전자의 발현량 확인
 고찰
 인용문헌

키워드

Human embryonic stem cells Human induced pluripotent stem cells Embryoid body Multiplex RT- PCR Pluripotency Differentiation

저자

  • 김정모 [ Jung-Mo Kim | 차의과학대학 의생명과학대학원 줄기세포 연구실 ]
  • 조윤정 [ Youn-Jeong Cho | 차의과학대학 의생명과학대학원 줄기세포 연구실 ]
  • 손온주 [ Onju Son | 차의과학대학 의생명과학대학원 줄기세포 연구실 ]
  • 홍기성 [ Ki-Sung Hong | 차바이오앤디오스텍 ]
  • 정형민 [ Hyung-Min Chung | 차의과학대학 의생명과학대학원 줄기세포 연구실 차바이오앤디오스텍 ] Corresponding author

참고문헌

자료제공 : 네이버학술정보

간행물 정보

발행기관

  • 발행기관명
    한국동물생명공학회(구 한국동물번식학회) [The Korean Society of Animal Reproduction and Biotechnology]
  • 설립연도
    1976
  • 분야
    농수해양>축산학
  • 소개
    동물번식생리학, 동물생명공학, 수의학, 인공수정 및 수정란이식을 이용한 동물개량에 관한 이론과 기술의 발전을 통해 학계, 연구계, 산업계 및 양축가 상호간의 협력을 도모함으로써 동물과학발전 및 사회일반의 이익에 기여 한다는 목적을 위해 노력해 나가겠습니다.

간행물

  • 간행물명
    Reproductive & developmental biology
  • 간기
    계간
  • pISSN
    1738-2432
  • eISSN
    2288-0151
  • 수록기간
    1977~2018
  • 십진분류
    KDC 527 DDC 636

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