Zonaria diesingiana Extract Inhibits Melanogenesis via Selective Suppression of Tyrosinase Activity and Expression in α-MSH-Stimulated B16F10 Cells
α-MSH로 자극된 B16F10 세포에서 Tyrosinase 활성 및 발현의 선택적 억제를 통한 반주름말 추출물의 멜라닌 생성 저해 효능
Purpose: Marine bioresources have great potential for the food, pharmaceutical, and cosmetic industries; however, the biological effects of Zonaria diesingiana (ZD), a species of brown algae, are unclear. In this study, we investigated the antioxidant and anti-melanogenic effects of a ZD extract. Methods: The antioxidant effect of ZD was examined using ABTS+ and DPPH radical scavenging assays, and the total polyphenol and flavonoid content was measured. To examine the anti-melanogenic effect of the ZD extract, melanin content and tyrosinase activity in α-MSH-stimulated B16F10 cells, as well as cell-free tyrosinase activity, were measured. In addition, the protein levels of tyrosinase and tyrosinase-related proteins (TRPs), and the mRNA expression of tyrosinase, TRPs, and microphthalmia-associated transcription factor (MITF) were determined by Western blot analysis and qRT-PCR, respectively. Results: The ZD extract exhibited significant antioxidant activity by scavenging ABTS+ and DPPH radicals, and it contained polyphenols and flavonoids. ZD extract effectively suppressed melanin synthesis and cellular tyrosinase activity in α-MSH-stimulated B16F10 cells and inhibited the reaction between tyrosinase and its substrate. Notably, the ZD extract selectively reduced the protein level of tyrosinase without affecting TRP-1 and TRP-2. In addition, only tyrosinase mRNA expression was significantly inhibited by the ZD extract, whereas TRP-1, TRP-2, and MITF mRNA expression were unchanged compared with the α-MSH-treated group. Conclusion: ZD extract exhibits potent antioxidant activity by scavenging radicals and exerts anti-melanogenic effect by selectively suppressing tyrosinase activity and expression in α-MSH-stimulated B16F10 cells. These results indicate that ZD extract may be used as a functional ingredient for skin-whitening cosmetics.
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목적: 해양생물자원은 식품, 의약품 및 화장품 산업에서 높은 잠재력을 가지고 있다. 그러나 갈조류에 속하는 반주름말(Zonaria diesingiana, ZD)의 생리활성 효능에 대해서는 거의 알려져 있지 않다. 이에 본 연구에서는 반주름말 추출물의 항산화 활성 및 멜라 닌 생성 억제 효능을 확인하고자 하였다. 방법: 반주름말 추출물의 항산화 활성은 ABTS+ 및 DPPH 라디칼 소거능 평가를 통해 확 인하였으며, 추출물 내 포함된 총 폴리페놀과 플라보노이드 함량을 측정하였다. 멜라닌 생성 억제 효능을 확인하기 위해, α-MSH 로 자극된 B16F10 세포에서 멜라닌 함량 및 tyrosinase 활성과 cell-free tyrosinase 저해 활성을 평가하였다. 또한, tyrosinase 와 tyrosinase-related proteins (TRPs)의 단백질 양 변화와 tyrosinase, TRPs 및 microphthalmia-associated transcription factor (MITF) mRNA 발현양을 각각 Western blotting과 qRT-PCR을 통해 분석하였다. 결과: 반주름말 추출물은 ABTS+ 및 DPPH 라 디칼을 유의하게 소거함으로써 항산화 활성을 나타내었으며 폴리페놀 및 플라보노이드류를 함유하고 있음을 확인하였다. 반주름 말 추출물은 α-MSH로 자극된 B16F10 세포에서 멜라닌 생성과 세포 내 tyrosinase 활성을 효과적으로 억제하였으며 mushroom tyrosinase와 기질 간의 반응도 직접적으로 저해하였다. 특히, 반주름말 추출물은 TRP-1과 TRP-2 단백질에는 영향을 미치지 않 으면서 tyrosinase 단백질만 선택적으로 감소시켰다. 게다가, TRP-1, TRP-2, 및 MITF mRNA 발현 수준은 α-MSH 단독 처리군과 유사한 반면, tyrosinase mRNA 발현만이 반주름말 추출물에 의해 선택적으로 억제되었다. 결론: 반주름말 추출물은 라디칼소거능을 통해 항산화 활성을 나타내었으며 α-MSH로 자극된 B16F10 세포에서 tyrosinase 활성 및 발현을 선택적으로 억제함으로써 멜라닌 생성을 억제함을 확인하였다. 이러한 결과는 향후 반주름말 추출물이 피부 미백을 위한 기능성 소재로 활용될 수 있음을 시사한다
Abstract Introduction Methods 1. 시료 정보 2. ABTS+ 라디칼 소거능 측정 3. DPPH 라디칼 소거능 측정 4. 총 폴리페놀 및 플라보노이드 함량 측정 5. 세포 배양 및 세포 생존율 측정 6. 멜라닌 함량 측정 7. 세포 내 tyrosinase 활성 측정 8. Cell-free Tyrosinase 저해 활성 측정 9. Western blotting 10. Quantitative real time PCR (qRT-PCR) 11. 통계 분석 Results and Discussion 1. 반주름말 추출물의 라디칼 소거능 2. 반주름말 추출물 내 총 폴리페놀 및 플라보노이드 함량 분석 3. 반주름말 추출물이 B16F10 세포 생존에 미치는 영향 4. 반주름말 추출물의 멜라닌 생성 억제 효능 5. 반주름말 추출물에 의한 멜라닌 생성 관련 단백질의 변화 6. 반주름말 추출물이 멜라닌 생성 관련 유전자 발현에 미치는 영향 Conclusion References 국문초록 참고문헌 中文摘要