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초록

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Human ferritin H- and L-chain genes (hfH and hfL) were cloned into the yeast shuttle vector YEp352 containing the GAL1 (galactokinase) and GAL10 (epimerase) divergent promoters and the vectors constructed were used to transform Saccharomyces cerevisiae 2805. SDS-PAGE displayed expression of the introduced hfH and hfL in both recombinant strains of Y1H10L and Y1L10H. The ferritin subunits, that represented ca. 22% and 15% of the soluble proteins in Y1H10L and Y1L10H, were spontaneously assembled into active ferritin heteropolymers. The H subunit content of the purified recombinant human ferritin heteropolymers was proven to reflect the relative expression yield of the subunits. When the cells of 2d culture were incubated with 14.3 mM Fe(II), the cellular iron concentration of Y1H10L and Y1L10H was 1.7 and 2.0 times,
respectively, that of the control strain. It is assumed that increase in the iron uptake of the recombinant yeasts is closely related to ferritin expression and H subunit content.

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본 연구에서는 유도성이며 양방향성 promoter인 GAL1-GAL10 promoter에 사람 ferritin H- 및 L-chain 유전자 (hfH & hfL)를 연결하여 재조합 플라스미드를 구축하고 이들을 S.cerevisiae 2805에 형질 전환시켜 두 외래 유전자를 동일 세포내에서 성공적으로 발현시켰다. 균주 Y1H10L과 Y1L10H에 있어서 ferritin 발현은 여러 시험 배지 중 2% galactose를 포함하는 배지에서 가장 높게 나타났으며 이틀간 배양 시 subunit의 총 발현양이 각각 전체 수용성 단백질의 약 22%와 15%에 해당하였다. 각 균주에서 발현된 H 및 L subunit들은 비변성 젤을 사용한 전기영동의 결과 자발적으로 이형집합체로 조합되어짐이 확인되었고, 또한 철 축적의 활성을 보였다. 재조합 ferritin 이형집합체를 분리하여 H:L subunit의 함량을 분석한 결과 발현된 subunit의 비율과 일치하였다. 재조합 효모 균주 Y1H10L과 Y1L10H를 14.3 mM ferrous sulfate와 반응시켰을 때, 세포 내 철의 농도는 대조균주의 농도에 비해 각각 1.7배와 2.0배 증진되었음을 보였다. 재조합 효모에서의 철 흡수량의 증가는 ferritin 발현율이나 subunit의 상대적인 발현양과 밀접한 관련이 있을 것으로 유추되었다.

목차

Abstract
 서론
 재료 및 방법
  사용 균주 및 플라스미드
  배지 및 배양 방법
  Ferritin 발현 재조합 플라스미드 구축
  효모 형질 전환체의 선별과 ferritin의 세포내 발현 효율
  전기영동
  철 이온의 흡수 및 원자 흡광 광도계
 결과 및 고찰
  Ferritin 이형집합체 발현 재조합 플라스미드의 구축
  Glucose/galactose 농도에 따른 균체 증식과 ferritin 발현
  효모에서 생산된 사람 ferritin H 및 L subunit의 조합
  철 이온의 흡수 및 원자 흡광 광도계
 요약
 REFERENCES

키워드

저자

• 장유정 [ Yu-Jung Chang | 전북대학교 자연대 생물과학부 및 유전공학연구소 ]
• 박충웅 [ Chung-Ung Park | 전북대학교 자연대 생물과학부 및 유전공학연구소 ]
• 김경숙 [ Kyung-Suk Kim | 전북대학교 자연대 생물과학부 및 유전공학연구소 ] Corresponding author

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• 간행물명

  KSBB Journal

• 간기

  격월간

• pISSN

  1225-7117

• 수록기간

  2009~2013

• 십진분류

  KDC 476 DDC 576