Earticle

초록

영어

Six lumbrokinase (LK) fractions from Lumbricus rubellus lysates were purified by a series of column chromatographies. The molecular weights of the six LK fractions appeared to range from 24.6 to 33.1 kDa. In the experimental model of rat venous thrombosis, the thrombus weight and PAI activity decreased significantly when the LK was administered orally. However, the activities of APTT, PT and plasmin showed a significant increase. The aggregation of rat platelets pretreated with various LK doses was inhibited by thrombin, and the MDA generation decreased. The rat thoracic aorta and mesentric arteries contracted with phenylephrine relaxed due to the treatment of the LK fractions. These results suggest that the fibrinolytic effects of LK were mediated not only by proteolytic activity, but also by the inhibition of platelet agregation and
the relaxation of blood vessels. It is concluded that the LK may be useful as a hemolytic agent for treatment of fibrin clot.

한국어

한국산 지렁이 (Lumbricus rubellus) 분쇄액으로부터 연속적인 column chromatography로 6종의 lumbrokinase (LK) fractions를 얻었다. 여섯 종의 LK fractions의 분자량은 24.6~33.1 kDa 사이였다. rat venous thrombosis를 이용한 실험모델에서, LK분획을 oral administration한 쥐에서 thrombus 중량은 유의하게 감소하였고, APTT, PT와 plasmin 활성도 유의하게 증가하였고, PAI activity도 유의하게 감소하였다. rat platelets를 LK 분획으로 전 처리하였을 때에 thrombin에 의한 응고는 억제되었고, MDA 생산도 감소되었다. 쥐의 흉대동맥과 장간막동맥을 phenylephrine으로 수축을 시킨 후에 LK 분획을 각각 처리하였을 때에 혈관이 이완되었다. 상기의 결과는 LK분획이 fibrinolytic activity 뿐만 아니라 platelet 응집의 억제와 혈관의 이완작용에도 영향을 준다는 것을 의미한다. 결론적으로 LK는 fibrin clot치료를 위한 hemolytic agent로서 유용하다고 판단한다. 2-아릴프로피온산 계열의 키랄 의약품의 효소적 dynamic kinetic resolution (DKR) 공정에서 라세미화 염기촉매로 트리 옥틸아민이 지금까지 주로 사용되어 왔으나 반응매질에 녹은 상태로 작용해 회수 및 재사용이 어려웠다. 본 연구에서는 이를 개선하고자 라세미화 반응을 위한 고효율 고체 염기를 탐색해 보았다. 45°C, 아이소옥탄 내에서 (S)-나프록센 2,2,2-트리플로로에틸 씨오에스터를 기질로 무기 염기류, 염기성 음이온교환수지류, resin-bound 염기류 등을 시험한 결과, 약 염기성 음이온교환수지인 DIAION WA30을 사용하였을 때 가장 효과적이었다. DIAION WA30의 2차 interconversion constant (k*int)는 8.6×10-4 mM-1h-1이며 동일한 실험조건 하에서 수행한 트리옥틸아민 (k*int = 2.5×10-4 mM-1h-1)에 비해 약 3배가 높았다. 효소 활성에 필수적인 물의 양에 따른 DIAION WA30의 라세미화 효율에 관하여 실험한 결과, 물의 양이 증가할수록 그 효율은 감소하였다. DIAION WA30을 라세미화 촉매로 사용하여 아이소옥탄 내에서 라세믹 나프록센 2,2,2-트리플로로에 틸 씨오에스터의 효소적 DKR 반응을 수행해 보았다. 그 결과 DIAION WA30을 사용하지 않은 경우에 비해 반응 전환율과 생성물의 광학 순도는 급격히 향상되었다. 전통적 광학분할 반응의 최대 50%라는 전환율의 제한이 본 연구에서 찾은 DIAION WA30을 첨가함으로써 성공적으로 극복되었다.
또한 고체 염기촉매인 DIAION WA30의 사용은 라세미화 촉매의 회수 및 재사용이 가능하게 해준다.

목차

Abstract
 서론
 재료 및 방법
  실험동물
  Lumbrokinase 효소의 정제
  Casein 분해법
  Fibrin 평판법
  전기영동을 이용한 피브린 분해효소의 확인
  혈전분해 효과측정
  혈액응고시간
 결과
  지렁이에서 lumbrokinase의 분리정제
  정맥 혈전 유도 모델에서 혈전용해 효과
  혈소판 응집 억제 효과
  혈관 이완 효과
  혈관내피세포 존재 유무에 따른 혈관근 이완효과
  효소활성에 의한 혈관근 이완 효과
  PAR-2 활성화에 따른 혈관근 이완 효과
 고찰
 요약
 REFERENCES

키워드

저자

• 조일한 [ Il Hwan Cho | 신풍제약(주)중앙연구소 ]
• 이철규 [ Chul Kyu Lee | 신풍제약(주)중앙연구소 ]
• 임현길 [ Hun Gil Lim | 건국대학교 생명과학과, 한양대학교 의과대학 심장연구센터 ]
• 이형환 [ Hyung Hoan Lee | 건국대학교 생명과학과 ] Corresponding author

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• 간행물명

  KSBB Journal

• 간기

  격월간

• pISSN

  1225-7117

• 수록기간

  2009~2013

• 십진분류

  KDC 476 DDC 576