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This study was carried out to develop knock-in vector for EGFP (enhanced green fluorescent protein) expression in porcine B-casein locus. For construction of knock-in vector using porcine B-casein gene, we cloned the B-casein genome DNA from porcine fetal fibroblast cells, EGFP and SV40 polyA signal using PCR. The knock-in vectors consisted of a 5-kb fragment as the 5' recombination arm and a 2.7-kb fragment as the 3' recombination arm. We used the neomycin resistance gene (neor) as a positive selectable marker and the diphtheria toxin A (DT-A) gene as a negative selectable marker. To demonstrate EGFP expression from knock-in vector, we are transfected knock-in vector that has EGFP gene in murine mammary epithelial cell line HC11 cells with pSV2 neo plasmid. The EGFP expression was detected in HC11 cells transfected knock-in vector. This result demonstrates that this knock-in vector may be used for the development of knock-in transgenic pig.

한국어

본 연구는 돼지 B-casein 유전자 위치에서 EGFP가 발현될 수 있는 knock-in 벡터를 구축하기 위하여 실시되었다. 돼지의 B-casein 유전자를 이용하여 knock-in 벡터를 구축하기 위해 돼지의 태아 섬유아세포로부터 B-casein 유전자를 동정하였고 EGFP, SV4O polyA signal을 동정하였다. Knock-in 벡터는 5' 상동 영역 약 5 kb와 3' 상동 영역 약 2.7 kb로 구성되어있으며, positive selection marker로 neor 유전자를, negative selection marker로 DT-A 유전자를 사용하였다. 구축된 knock-in 벡터로부터 EGFP의 발현을 확인하기 위하여 생쥐 유선 세포인 HC11 세포에 knock-in 벡터를 도입하였다. 그 결과 EGFP의 발현을 HC11 세포에서 확인하였다. 이와 같은 결과로서 이 block-in 벡터는 knock-in 형질전환 돼지를 생산하는데 사용될 수 있을 것으로 생각된다.

목차

ABSTRACT
 요약
 서론
 재료 및 방법
 결과
 고찰
 인용문헌

키워드

저자

• 이상미 [ Sang Mi Lee | 전남대학교 농업생명과학대학 농업과학기술연구소 동물자원학부 ]
• 김혜민 [ Hey-Min Kim | 전남대학교 농업생명과학대학 농업과학기술연구소 동물자원학부 ]
• 문승주 [ Seung Ju Moon | 전남대학교 농업생명과학대학 농업과학기술연구소 동물자원학부 ]
• 강만종 [ Man-Jong Kang | 전남대학교 농업생명과학대학 농업과학기술연구소 동물자원학부 ]

참고문헌

발행기관

간행물

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• 간행물명

  Reproductive & developmental biology

• 간기

  계간

• pISSN

  1738-2432

• eISSN

  2288-0151

• 수록기간

  1977~2018

• 십진분류

  KDC 527 DDC 636