Earticle

초록

한국어

돼지의 장기를 영장류로 이식하기 위해서는 단계적인 면역거부반응을 억제하는 것이 중요하며, 이를 해결하기 위하여 이전 연구에서 MGH 미니돼지로부터 alpha-1,3 Galactocyl transferase(GalT) 유전자 좌위에 membrane cofactor protein(MCP) 유전자가 삽입되 어 이종 이식 시에 생기는 면역거부 반응을 극복한 돼지(GalT-MCP/-MCP)를 생산한 바 있다. 그러나 면역거부반응은 억제되었지만 혈액응고 장애로 인한 문제가 발생하여 이를 억제 할 수 있는 연구가 필요하다. 혈관표면의 CD73(ecto-5’ nucleotidase)과 CD39는 면역억제 및 응고인자를 조절하는 효소로 GalT-MCP/-MCP와 더불어 유전자를 과 발현 시킬 경우 이종 이식 시에 생기는 면역거부, 혈액응고 등의 거부반응을 추가로 억제시킬 수 있을 것으로 판단된다. 따라서 본 실험에서는 GalT-MCP/-MCP MGH 미니돼지의 대동맥에서 혈관 내피세 포를 분리 및 배양하여 형태학적, 면역형광염색법으로 그 특성을 확인하였다. CD73은 다 양한 암조직에서 과 발현되어 암세포의 성장을 촉진한다고 알려져 있어 혈관내피세포에 만 특이적으로 발현하는 돼지의 Icam2 promoter에 2A 시스템을 활용하여 CD39/CD73 유전자를 연결한 동시 발현 벡터를 제작 후 도입하였다. 4주령 MGH 미니돼지로부터 적 출한 대동맥에서 type 1 collagenase 효소를 이용하여 혈관내피세포를 분리하였다. 분리 된 세포는 내피세포의 표지인자인 vWF(von Willebrand factor) 와 CD31 antibody를 사용 하여 면역형광염색법으로 염색하거나 신생혈관생성을 확인하는 tube formation assay를 실시하여 혈관내피세포임을 확인하였다. 그 다음, CD39/CD73 발현 벡터를 nucleofection 방법으로 혈관내피세포 내에 도입한 후 flow cytometry로 발현을 분석하였다. CD39와 CD73의 발현율은 각각 33.4%, 26.8%로 나타났다. 따라서 본 연구에서는 GalT-MCP/-MCP MGH 돼지의 대동맥에서 분리한 혈관내피세포에 혈액응고인자를 조절할 수 있는 유전자 를 도입하였을 경우 이종이식의 부작용을 억제하는 연구에 유용하게 사용될 수 있을 것 으로 판단된다.

키워드

저자

• 지수정 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 이건섭 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 박상현 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 이해선 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 김경운 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 변승준 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 옥선아 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 황성수 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 오건봉 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]

참고문헌

발행기관

간행물

표지보기 관심저널 등록

• 간행물명

  발생공학 국제심포지엄 및 학술대회 [International Symposium on Developmental Biotechnology]

• 간기

  연간

• 수록기간

  2004~2018

• 십진분류

  KDC 527 DDC 636