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최근 alpha-Gal knock out (GTKO)/MCP/TBM 형질전환 돼지를 이용한 심장 이식 연구 에서 수여 원숭이가 최대 945일 생존한 것으로 보고되었다. 도입된 유전자에 의해 wild type 돼지의 심장을 이식하였을 때 항체와 보체 활성에 의해 나타나는 초급성 면역거부 반응과 급성 체액성 거부반응이 제어된 것으로 판단된다. 이에 본 연구에서는 Gal KO 기반 위에 일부 염기서열을 변경한 Membrane cofactor protein (MCP) 유전자를 도입함 으로써 발현 효율을 개선하고자 하였다. 동시에 혈액 응고 과정의 억제제로서 Thrombomodulin (TBM)을 발현하는 돼지 체세포주를 구축하는 것을 목적으로 한다. 이를 위하여 CAG 프로모터와 2A sequence를 통하여 MCP와 TBM 유전자가 동시에 전사되도록 한 것과 내피세포 특이적인 Icam2 프로모터를 이용하여 TBM을 따로 발현시킨 두 가지 vector를 제작하였다. 각 vector는 GalT-MCP/-MCP 세포에 도입한 후 MCP에 대한 항체를 이용 하여 두 차례에 걸친 cell sorting을 진행하였다. MCP-positive cell은 single cell로 배양하 였으며 flow cytometry 분석을 통하여 각 clone 별로 유전자의 발현 정도를 비교하였다. TBM 유전자를 CAG 프로모터와 연결한 경우, MCP와 더불어 TBM의 발현도 함께 증가 하였다. 반면, Icam2 프로모터를 통하여 TBM을 따로 발현시킨 clone에서는 TBM의 발현 이 제한됨을 확인할 수 있었다. 또한 선발된 모든 clone에서 MCP 발현이 개선됨에 따라 원숭이 보체에 대한 저항성이 유의적으로 향상되었다. 이 중 염색체 변이가 일어나지 않 은 2개의 clone을 확인하였다. 이를 이용한 개체의 생산은 차후 이종장기 이식 시 발생하 는 거부반응을 억제하여 개체의 생존기간을 연장하는데 기여할 것으로 기대된다.

키워드

저자

• 이해선 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 이건섭 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 박상현 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 지수정 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 김경운 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 변승준 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 옥선아 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 황성수 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 오건봉 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]

참고문헌

발행기관

간행물

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• 간행물명

  발생공학 국제심포지엄 및 학술대회 [International Symposium on Developmental Biotechnology]

• 간기

  연간

• 수록기간

  2004~2018

• 십진분류

  KDC 527 DDC 636