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초록

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Human Leukocyte Antigen E (HLA-E)는 Natural killer cell의 활성을 억제시키는 리간드 역할을 수행하는 인자로서 모든 세포에서 발현되며, 이러한 기능적 특성에 의하여 Gal 항원이 없음과 동시에 HLA-E를 과발현하는 돼지 장기를 원숭이에 이식할 경우 발생하는 세포성 거부반응을 억제시킬 수 있을 것으로 기대된다. 본 연구는 돼지의 전 조직 및 세 포에서 HLA-E의 과발현을 조절할 수 있는 돼지의 프로모터를 개발하고자 실시하였다. 이 를 위하여 돼지의 모든 세포에서 발현되는 Elongation factor 1 alpha(pEf1a) 유전자의 프 로모터 영역 중 –750 bp에서 엑손 1과 인트론 1, 그리고 엑손 2의 미번역 부위를 포함하 는 1.5 kb의 프로모터를 클로닝한 후 HLA-E cDNA를 연결한 발현 벡터를 제작하였다. HLA-E 유전자의 발현 조절능을 비교하기 위하여 대조군으로 사람 EF1α 프로모터, 그리 고 돼지에서 외래유전자의 발현을 효율적으로 조절한다고 알려진 CMV enhancer chicken β-actin (CAG) 프로모터에 HLA-E cDNA를 각각 연결한 발현 벡터를 제작하였다. 각 각의 발현벡터를 HEK293 세포에 도입후 quantitative real-time RT PCR (qPCR) 방법으 로 분석한 결과, pEf1a 프로모터의 조절에 의한 HLA-E의 발현 수준이 대조군에 비해 유 의적(p<0.05)으로 높은 것을 확인할 수 있었다. 돼지의 귀 조직에서 분리한 섬유아세포 (fibroblasts)와 대동맥 혈관내피세포에 도입한 후 qPCR, western blot 방법으로 HLA-E의 발현 수준을 분석하였다. 그 결과 pEf1a 프로모터는, CAG, EF1a 프로모터와 유의적인 차이 없이 효율적으로 HLA-E의 발현을 조절하는 것을 확인하였다. 이러한 결과로 본 연 구에서 클로닝한 pEf1a 프로모터의 HLA-E의 발현 조절능은 CAG의 것과 유사하다고 판 단되며, 형질전환 돼지에서 HLA-E 효율적인 발현을 조절할 것으로 기대된다.

키워드

저자

• 양현 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 이해선 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 김점순 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 최훈성 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 정선근 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 김경운 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 김동훈 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 기획조정과 ]
• 오건봉 [ 농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]

참고문헌

발행기관

간행물

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• 간행물명

  발생공학 국제심포지엄 및 학술대회 [International Symposium on Developmental Biotechnology]

• 간기

  연간

• 수록기간

  2004~2018

• 십진분류

  KDC 527 DDC 636