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미세주입된 소 수정란에서 유전자적중 효율 및 배반포 품질 확인
Determination of Gene Target Efficiency and Blastocyst Quality in Microinjected Bovine Embryos
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- 발행기관
- 강원대학교 동물생명과학연구소(구 강원대학교 동물자원공동연구소) 바로가기
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- 간행물
- 동물자원연구 KCI 등재 바로가기
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- 통권
- 제29권 2호 (2018.06)바로가기
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- 페이지
- pp.56-66
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- 저자
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- 언어
- 한국어(KOR)
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- URL
- https://www.earticle.net/Article/A333338
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원문정보
초록
- 영어
- This study aimed to produce high-quality blastocysts and establish appropriate microinjection conditions for the introduction of target gene. First, we identified embryo development to the blastocyst stage after microinjection using the CRISPR/Cas9 system on the Cas9 protein or mRNA. As a result, we confirmed that blastocyst development in the Cas9 mRNA injected group significantly increased when compared to the Cas9 protein injected group (p<0.05). However, the blastocyst gene targeting rate increased in the Cas9 protein injected group when compared to the Cas9 mRNA injected group (p<0.05). Next, we treated the injection medium with 10 µg/ml of cytochalasin B (CB), and the microinjected embryos were cultured in CR1-aa medium supplemented with 0.1 µM of melatonin (Mela). Consequently, the blastocyst formation rate significantly increased in the CB treated group (p<0.05). After microinjecting embryos with the CB treated injection medium, we investigated blastocyst formation and quality via Mela treatment. Consequently, the Mela treated group demonstrated significantly increased blastocyst formation rates when compared to the non-treated group (p<0.05). Furthermore, immunofluorescence assay using RAD51 (DNA repair detection protein) and H2AX139ph (DNA damage detection protein) showed an increase in RAD51 positive cells in Mela treated embryos. Therefore, we verified the improvement in knock-in efficiency in microinjected bovine embryos using Cas9 protein. These results also demonstrated that the positive effect of the CB and Mela treatments improved the embryonic developmental competence and blastocyst qualities in genetically-edited bovine embryos.
목차
ABSTRACT
Ⅰ. 서론
Ⅱ. 재료 및 방법
1. 시약
2. 난소 채취 및 체외성숙
3. 체외수정
4. 미세주입 및 체외배양
5. 도입 유전자의 적중 확인
6. 면역형광염색법
7. 통계 분석
Ⅲ. 결과
1. CRISPR/Cas9 nuclease에 따른 유전자 적중율 확인
2. 미세주입 시 cytochalasin B(CB)의 첨가 효과
3. 미세주입 후 초기배 발달에서의 멜라토닌의 효과
4. 미세주입된 소 배반포에서의 품질 확인
Ⅳ. 고찰
Ⅴ. 요약
사사
Ⅵ. 참고문헌
키워드
CRISPR/Cas9 Microinjection Cytochalasin B Melatonin Bovine embryo저자
간행물 정보
발행기관
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- 발행기관명
- 강원대학교 동물생명과학연구소(구 강원대학교 동물자원공동연구소) [Institute of Animal Life Science Kangwon National University]
- 설립연도
- 1999
- 분야
- 농수해양>축산학
- 소개
- 1970년 3월에 설립된 본 연구소는 국내외 동물자원에 관한 기초 및 응용연구를 통하여 축산업 발전을 선도하고 산학협동 체제를 강화하여 지역사회 발전에 기여함은 물론 통일에 대비한 북한 동물자원에 관한 연구를 체계적으로 수행하기 위함을 근본 목적으로 하고 있다. 본 연구소는 다변화, 과학화된 동물자원 분야에서 이론과 실제를 결부하는 연구활동 뿐만 아니라 학술 및 산학협동 활동 등을 인정받아 1991년에 교육부로부터 법정 연구소로 지정되었으며 1996년에는 이공계 첨단기자재 지원대상 연구소, 한우특성화대학 연구소로 지정되었고 1999년에는 학술진흥재단 대학 부설 중점연구소로 지정되었다. 이러한 지원과 국내외 동물자원 분야의 과학적 정립 및 연구, 발전이라는 고유한 목적 하에서 현재 국제적으로 축산업분야 중 심각한 문제를 가지고 있는 전염성 질병 및 그 대책 마련 등의 연구를 통해 현장애로 및 문제점을 해결하고, 실용적 축산 분뇨처리 방법 개발 및 새로운 축산물 가공품 개발과 유전공학 기법을 이용한 새로운 동물의 작출, 유전적 능력이 우수한 개체의 생산과 육종, 새로운 사료자원의 개발 등의 분야에서 세계적으로 선도적인 연구를 수행하고 있으며 관련분야에서 인정받는 국제적인 연구소로 발전하기 위해 노력을 기울이고 있다.
간행물
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- 간행물명
- 동물자원연구 [Annals of Animal Resources Sciences]
- 간기
- 계간
- pISSN
- 1225-2964
- eISSN
- 2287-3317
- 수록기간
- 1999~2026
- 등재여부
- KCI 등재
- 십진분류
- KDC 527 DDC 636
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