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체세포에 있어서 Knock-in 벡터 상동영역 구조에 따른 Knock-in 효율
Knock-in Efficiency Depending on Homologous Arm Structure of the Knock-in Vector in the Bovine Fibroblasts

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  • 발행기관
    한국동물생명공학회(구 한국동물번식학회) 바로가기
  • 간행물
    Reproductive & developmental biology 바로가기
  • 통권
    Volume 41 No 1 (2017.02)바로가기
  • 페이지
    pp.7-16
  • 저자
    김세은, 박다솜, 구덕본, 강만종
  • 언어
    한국어(KOR)
  • URL
    https://www.earticle.net/Article/A304833

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원문정보

초록

영어
The knock-in efficiency in the fibroblast is very important to produce transgenic domestic animal using nuclear transfer. In this research, we constructed three kinds of different knock-in vectors to study the efficiency of knock-in depending on structure of knock-in vector with different size of homologous arm on the β-casein gene locus in the somatic cells; DT-A_cEndo Knock-in vector, DT-A_tEndo Knock-in vector I, and DT-A_tEndo Knock-in vector II. The knock-in vector consists of 4.8 kb or 1.06 kb of 5’ arm region and 1.8 kb or 0.64 kb of 3’ arm region, and neomycin resistance gene(neor) as a positive selection marker gene. The cEndo Knock-in vector had 4.8 kb and 1.8 kb homologous arm. The tEndo Knock-in vector I had 1.06 kb and 0.64 kb homologous arm and tEndo Knock-in vector II had 1.06 kb and 1.8 kb homologous arm. To express endostatin gene as transgene, the F2A sequence was fused to the 5’ terminal of endostatin gene and inserted into exon 7 of the β-casein gene. The knock-in vector and TALEN were introduced into the bovine fibroblast by electroporation. The knock-in efficiencies of cEndo, tEndo I, and tEndo II vector were 4.6%, 2.2% and 4.8%, respectively. These results indicated that size of 3’ arm in the knock-in vector is important for TALEN-mediated homologous recombination in the fibroblast. In conclusion, our knock-in system may help to create transgenic dairy cattle expressing human endostatin protein via the endogenous expression system of the bovine β-casein gene in the mammary gland.

목차

ABSTRACT
 서론
 재료 및 방법
  유전자 동정
  Knock-in 벡터의 구축
  TALEN 제작과 활성 검증
  세포 배양 및 Knock-in 벡터의 도입
  Knock-in 세포의 PCR 동정
 결과 및 고찰
  Knock-in 벡터 구축과 염기배열 검증
  TALEN 활성 검증
  Knock-in 벡터 구조에 따른 Knock-in 효율
 REFERENCES

키워드

Knock-in β-Casein gene Somatic cell Homologous recombination Bovine

저자

  • 김세은 [ Se Eun Kim | 전남대학교 농업생명과학대학 동물자원학부 ]
  • 박다솜 [ Da Som Park | 전남대학교 농업생명과학대학 동물자원학부 ]
  • 구덕본 [ Deog-Bon Koo | 대구대학교 공과대학 생명공학과 ]
  • 강만종 [ Man-Jong Kang | 전남대학교 농업생명과학대학 동물자원학부 ] Corresponding author

참고문헌

자료제공 : 네이버학술정보

간행물 정보

발행기관

  • 발행기관명
    한국동물생명공학회(구 한국동물번식학회) [The Korean Society of Animal Reproduction and Biotechnology]
  • 설립연도
    1976
  • 분야
    농수해양>축산학
  • 소개
    동물번식생리학, 동물생명공학, 수의학, 인공수정 및 수정란이식을 이용한 동물개량에 관한 이론과 기술의 발전을 통해 학계, 연구계, 산업계 및 양축가 상호간의 협력을 도모함으로써 동물과학발전 및 사회일반의 이익에 기여 한다는 목적을 위해 노력해 나가겠습니다.

간행물

  • 간행물명
    Reproductive & developmental biology
  • 간기
    계간
  • pISSN
    1738-2432
  • eISSN
    2288-0151
  • 수록기간
    1977~2018
  • 십진분류
    KDC 527 DDC 636

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