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CRISPR/Cas9-mediated knockout of neuraminidase genes in CHO cells for production of glycoproteins with increased content of sialic acids.

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  • 발행기관
    한국당과학회 바로가기
  • 간행물
    한국당과학회 학술대회 바로가기
  • 통권
    2016 한국당과학회 하계학술대회 (2016.07)바로가기
  • 페이지
    pp.35-35
  • 저자
    Se-Jong Lim, Keun Koo Shin, Ohsuk Kwon, Doo-Byoung Oh
  • 언어
    영어(ENG)
  • URL
    https://www.earticle.net/Article/A294753

※ 원문제공기관과의 협약기간이 종료되어 열람이 제한될 수 있습니다.

원문정보

초록

영어
Sialic acids present on non-reducing terminal of glycan is important for prolonged in vivo half-life of glycoproteins. Many efforts have been made to increase the sialic acid content in the manufacturing of therapeutic glycoproteins because glycoproteins containing non-sialylated glycans do not show effective in vivo efficacies owing to a short half-life. It was reported that knock down of neuraminidase expression using the RNA interference (RNAi) technology enhanced protein sialylation in CHO cells which are the most widely used for therapeutic glycoprotein production [1]. However, knock down strategy did not completely shut down the neuraminidase expression. In this study, we performed knockout of neuraminidase genes in CHO cells by using the CRISPR/Cas9 genome editing technology. Only three neuraminidase (Neu1, Neu2, and Neu3) were actively expressed in CHO cells when analyzing their expressions using real-time polymerase chain reaction (PCR). Neu3 is located in the plasma membrane while Neu1 and Neu2 exist in lysosome and cytosol, respectively. After the transfection of vectors expressing Cas9 and sgRNAs, Neu-disrupted clones were selected by using the T7 endonucleases 1 (T7E1) assay and further confirmed by the sequencing analysis of the corresponding editing sites. All of single mutants (Neu1-, Neu2-, and Neu3-disrupted clones) displayed similar proliferation ability compared to wild-type CHO cells. Two of double Neu-disrupted mutants (Neu1Neu3- and Neu2Neu3-dirupted mutants) were currently constructed. Our goal is to construct the triple knockout CHO cell mutant (Neu1Neu2Neu3-disrupted clone) and investigate its phenotypes and features.

저자

  • Se-Jong Lim [ Synthetic Biology and Bioengineering Research Center, Korean Research Institute of Bioscience & Biotechnology, Daejeon, Korea, BiosystemsandBioengineeringProgram,UniversityofScienceandTechnology(UST),Daejeon,Korea ]
  • Keun Koo Shin [ Synthetic Biology and Bioengineering Research Center, Korean Research Institute of Bioscience & Biotechnology, Daejeon, Korea ]
  • Ohsuk Kwon [ Synthetic Biology and Bioengineering Research Center, Korean Research Institute of Bioscience & Biotechnology, Daejeon, Korea, BiosystemsandBioengineeringProgram,UniversityofScienceandTechnology(UST),Daejeon,Korea ]
  • Doo-Byoung Oh [ Synthetic Biology and Bioengineering Research Center, Korean Research Institute of Bioscience & Biotechnology, Daejeon, Korea, BiosystemsandBioengineeringProgram,UniversityofScienceandTechnology(UST),Daejeon,Korea ]

참고문헌

자료제공 : 네이버학술정보

간행물 정보

발행기관

  • 발행기관명
    한국당과학회 [Korean Society for Glycoscience]
  • 설립연도
    2006
  • 분야
    의약학>약학
  • 소개
    본 학회는 화학, 생화학, 분자생물학, 미생물학, 식품공학, 의학, 약학, 유전공학 및 생물공학, 환경 및 기타 공업 등 전 분야의 탄수화물관련 이론과 기술을 연구 발전시키고 산학협동을 통해 이를 보급하여 국내 관련 산업의 발전 및 국민생활의 과학화에 기여하고자 하며, 이러한 목표와 비젼의 실현을 위해 회원들이 적극적인 참여와 활동을 전개하고자 한다.

간행물

  • 간행물명
    한국당과학회 학술대회
  • 간기
    연간
  • 수록기간
    2006~2022
  • 십진분류
    KDC 517 DDC 614

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