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Effects of Changes in Glycosylation Sites on Secretion of Recombinant Human Erythropoietin in Cultured CHO Cells

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  • 발행기관
    한국동물생명공학회(구 한국동물번식학회) 바로가기
  • 간행물
    Reproductive & developmental biology 바로가기
  • 통권
    Volume 27 No 4 (2003.12)바로가기
  • 페이지
    pp.299-307
  • 저자
    Lee, H. G, P. Y. Lee, Y. K. Lee, S. J. Kim, H. K. Chung, M. K. Seo, J. K. Park, K. S. Min, W. K. Chang
  • 언어
    영어(ENG)
  • URL
    https://www.earticle.net/Article/A26974

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원문정보

초록

영어
The effects of additions/deletions in glycosylated residues of recombinant human EPO (rhEPO) produced in CHO-K1 on their secretion were examined. hEPO cDNA was amplified from human liver mRNA and cloned into the pCR2.1 TOPO. Using overlapping-extension site-directed mutagenesis method, glycosylation sites at 24th, 38th, 83rd, and 126th were respectively or accumulatively removed by substituting its asparagine (or serine) with glutamine. To add novel glycosylation sites, 69 and 105th leucine was mutated to asparagine. Mutant and wild type rhEPO constructs were cloned into the pcDNA3 expression vector with CMV promoter and transfected into CHO cell line, CHO-K1, to produce mutant rhEPO mutant rhEPO proteins. Enzyme-linked immunosorbant assay (ELISA) and Western analysis with monoclonal anti-EPO antibody were performed using supernatants of the cultures showing transient and stable expressions respectively. Addition of novel glycosylation reduced rhEPO secretion dramatically while deletion mutants had little effect except some double deletion mutants (△24/83 and △38/83) and triple mutant (△24/38/83). This fact suggests that not single but combination of changes in glycosyl groups affect secretion of rhEPO in cell culture, possibly via changes in their conformations.

키워드

rhEPO Glycosylation site Site-directed mutagenesis CHO cell culture ELISA

저자

  • Lee, H. G [ Animal Biotechnology Division, NLRI, RDA ]
  • P. Y. Lee [ Animal Biotechnology Division, NLRI, RDA ]
  • Y. K. Lee [ Animal Biotechnology Division, NLRI, RDA ]
  • S. J. Kim [ Animal Biotechnology Division, NLRI, RDA ]
  • H. K. Chung [ Animal Biotechnology Division, NLRI, RDA ]
  • M. K. Seo [ Animal Biotechnology Division, NLRI, RDA ]
  • J. K. Park [ Animal Biotechnology Division, NLRI, RDA ]
  • K. S. Min [ Graduate School of Bio ＆ Information Technology, Hankyong National University ]
  • W. K. Chang [ Animal Biotechnology Division, NLRI, RDA ]

참고문헌

자료제공 : 네이버학술정보

간행물 정보

발행기관

  • 발행기관명
    한국동물생명공학회(구 한국동물번식학회) [The Korean Society of Animal Reproduction and Biotechnology]
  • 설립연도
    1976
  • 분야
    농수해양>축산학
  • 소개
    동물번식생리학, 동물생명공학, 수의학, 인공수정 및 수정란이식을 이용한 동물개량에 관한 이론과 기술의 발전을 통해 학계, 연구계, 산업계 및 양축가 상호간의 협력을 도모함으로써 동물과학발전 및 사회일반의 이익에 기여 한다는 목적을 위해 노력해 나가겠습니다.

간행물

  • 간행물명
    Reproductive & developmental biology
  • 간기
    계간
  • pISSN
    1738-2432
  • eISSN
    2288-0151
  • 수록기간
    1977~2018
  • 십진분류
    KDC 527 DDC 636

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