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초록

영어

Transgenic mice containing Diphtheria Toxin-A (DT -A) gene fused to proximal lck promoter sequences was used for analysis of DT-A gene expression and thymocyte development. The diphtheria toxin gene was expressed in thymus, spleen and liver of transgenic mice confirmed by RT-PCR and Northern blotting. A FACS analysis with thymocyte cell surface antigens antibodies (CD4 and CD8) showed that the number of peripheral mature single positive thymocytes (CD4/sup +/ and CD8/sup +/ cells) T-cells was severely reduced in transgenic mice compared to that in the non-transgenic littermates. A relative portion of CD8/sup +/ single positive thymocytes was about 33.2% in transgenic peripheral T-cells while 50.6% in wild type. Reduction of CD4/sup +/ cell numbers in transgenic mice was observed (5.9% in transgenic versus 10.3% in non-transgenic). The data from analysis of these transgenic mice indicate that the proximal lck promoter regulated the expression of DT-A gene at high level in developing thymocytes and the DT-A disrupted developing thymocytes in transgenic mice.

한국어

본 연구는 생체 내 세포 및 조직배양기로서의 면역결핍동물을 개발할 목적으로 proximal lck promoter와 DT-A gene를 이용하여 형질전환생쥐을 생산하고 이 형질전환생쥐의 면역세포에서 DT-A gene이 발현되는지를 분석하였다. 형질전환생쥐와 정상생쥐로부터 thymus, spleen 및 liver에서 RNA를 추출하여 RT-PCR수행하였는데 정상생쥐의 조직에서는 어떠한 DT-A gene의 발현양상을 얻을 수 없었으나 형질전환생쥐의 thymus, spleen, liver에 DT gene의 발현을 확인할 수 있었고, Northern blotting을 이용하여 형질전환생쥐의 thymus, spleen 및 liver에서 DT-A gene이 강하게 발현되는 것으로 나타났다. 형질전환생쥐 F₁ 및 F₂ 산자의 혈액에서 T-cell 발달의 분포도를 확인하기 위해 CD4 및 CD8 ntibody를 이용하여 FACS analysis를 실시하였는데 형질전환생쥐의 혈액 내 mature T-cell인 single positive thymocyte의 수가 정상생쥐에 비해 감소하는 경향을 나타냈다. 정상생쥐의 혈액 내 T-cell 중 CD8/sup +/ T-cell의 경우 약 50%를 나타냈으나 형질전환생쥐의 경우 33%로 감소하였고, CD4/sup +/ T-cell은 정상생쥐에서 10%를 차지하고 있으나 형질전환생쥐에서는 5.9%로 감소되는 것으로 분석되었다. 그러므로 본 연구의 형질전환생쥐에서 lck promoter에 의해 초기 immature한 상태의 T-cell에서 DT-A gene이 발현되어 발육중인 T-cell이 파괴 되어 mature 상태인 CD4/sup +/ CD8/sup -/나
CD4/sup -/CD8/sup +/ cells (single-positive)들이 감소된 것으로 확인되었다.

키워드

저자

• 나루세겐지 [ 충남대학교 동물자원학부, 형질전환복제돼지연구센터 ]
• 이승현 [ 서울대학교 유전자 이식연구소 ]
• 최화식 [ 김천대학교 임상병리학과 ]
• 이성호 [ 공주대학교 영상보건대학 ]
• 박창식 [ 충남대학교 동물자원학부, 형질전환복제돼지연구센터 ]
• 진동일 [ 충남대학교 동물자원학부, 형질전환복제돼지연구센터 ]

참고문헌

발행기관

간행물

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• 간행물명

  Reproductive & developmental biology

• 간기

  계간

• pISSN

  1738-2432

• eISSN

  2288-0151

• 수록기간

  1977~2018

• 십진분류

  KDC 527 DDC 636