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초록

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A형 혈우병은 혈액응고 제 8인자(FactorVIII: FVIII)가 유전적으로 결핍되어 나타나는 희귀병이며, FVIII인자는 내인성 혈액응고반응에 필수적으로 필요한 당단백질이다. 이러한 A형 혈우병 환자는 FVIII의 지속적인 주사에 의해 정상적인 혈액응고반응이 일어나고 생명연장이 가능하다. 본 연구는 인간 혈액응고 제 8인자 단백질영역 중 B-domain을 변형시킨 재조합체(FVIII-dB747)를 유즙으로 분비하는 형질전환 돼지의 후대를 계획적으로 종부시키면서 생산되는 형질전환돼지의 유즙으로부터 FVIII-dB747의 효율적인 정제를 위한 방법을 제공하기 위하여 수행되었다. 분만돈에 옥시토신을 투여하여 FVIII-dB747을 발현하는 유즙을 채취하여 원심분리를 통해 지질과 불순물을 제거하고, 유즙 내 복합적으로 존재하는 수 많은 카제인 단백질을 분획하기 위한 전처리 과정을 실시함으로써 분획의 정도를 확인하였다. 또한 전처리 과정을 통해 분획된 유즙을 이용하여 음이온 교환수지와 친화성 크로마토그래피 방법으로 FVIII-dB747의 정제를 시도하였다. 음이온 교환 크로마토그래피는 인간 혈장 유래의 FVIII을 정제하는데 사용되어지는 Q sepharose FF 컬럼을 이용하여 pH변화에 따른 분리도를 비교하였다. 또한 친화성 크로마토그래피는 B-domain이 결여된 재조합 인간 혈액응고 제 8인자(BDD rFVIII)을 정제하는데 이용 가능하다고 알려진 단일항체 리간드로 사용한 컬럼을 사용하여 수행하였다. 그 결과, 기존의 ammonium sulfate침전법을 이용한 침전방법보다는 간단하면서 효과적인 전처리 분획방법으로 개선되었으나, pH 변화에 따른 이온교환 수지를 활용한 분리법에서는 카제인 단백질이 FVIII-dB747이 포함된 분획과 함께 유출되는 현상이 발생되었다. FVIII-dB747 형질전환돼지의 유즙을 이온교환 수지로 분리할 경우 전처리과정 중 카제인 단백질을 제거하기 위한 ultra-filteration이 필요한 것을 알 수 있었다.

키워드

저자

• 오승호 [ 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 김지윤 [ 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 이원길 [ 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 정학재 [ 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 양병철 [ 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 박미령 [ 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 백선영 [ 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 박진기 [ 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 홍성구 [ 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]
• 오성종 [ 제주대학교 ]
• 김경운 [ 국립축산과학원 동물바이오공학과 ]

참고문헌

발행기관

간행물

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• 간행물명

  Reproductive & Developmental Biology(Supplement)

• 간기

  연간

• 수록기간

  2001~2017

• 십진분류

  KDC 527 DDC 636