Biochemical Characterization of Caspase-12 in Apoptosis and a Way for its Purification Using Fusion Proteins
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- 발행기관
- 조선대학교 기초과학연구원 바로가기
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- 간행물
- 통합자연과학논문집(구 조선자연과학논문집) KCI 등재 바로가기
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- 통권
- 제7권 2호 (2014.06)바로가기
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- 페이지
- pp.103-112
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- 저자
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- 언어
- 영어(ENG)
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- URL
- https://www.earticle.net/Article/A223584
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원문정보
초록
- 영어
- Caspase-12, mainly detected in endoplasmic reticulum (ER), has been suggested to play a role in ER- mediated apoptosis and inflammatory caspase activation pathway. Removal of the prodomain by caspase-3/-7 at Asp94 or m -calpain at Lys158 was reported to be a part of caspase-12-involved (in) apoptosis. To provide biochemical background for the processes, we purified and characterized three forms of caspase-12; Δpro1(G95-D419), rev-Δpro1[(T319-N419)- (G95-D318), a reverse form of Δpro1] and rev-Δpro2[(T319-N419)-(T159-D318)]. Activity of Δpro1, comparable (in compare) to those of the other two, decreased significantly under the physiological salt concentration and pH or by mutations at both Asp318 and Asp320. These indicated (indicate) that activation of caspase-12 may need pH drop and ion efflux observed during apoptotic process, and auto-proteolytic cleavage at the sites. Furthermore, constitutively active forms of caspase-12 could induce cell death, but no cleavage of caspase-3, DFF45 and Bid was observed, implying involvement of caspase-12 in a distinct way rather than in the well-known pathway.
목차
Abstract
1. Introduction
2. Experimental Section
2.1. Materials
2.2. Construction of Recombinant Caspase-12
2.3. Purification of Recombinant Caspase-12 and Caspase-7
2.4. Assay of Caspase Activity
2.5. Cell Culture, Transfection, and Cell Viability Assay
2.6 Immunoblot Analysis
2.7. DNA Fragmentation Assay
2.8. Caspase-12 Assay with Cell Extract
3. Results and Discussion
3.1. Construction and Purification of Caspase-12 Variants
3.2. Effects of pH and Ionic Strength on Caspase-12 Activity
3.3. Procaspase-12 Cleavage by Auto-proteolysis and Caspase-7, and Mapping the Cleavage Sites
3.4. Comparison of Activity of Caspase-12 Variants
3.5. Death of Cells Transfected with Variable Caspase-12 Constructs
Conclusion
References
키워드
Caspase-12 Caspase-7 m-Calpain Apoptosis Purification저자
간행물 정보
발행기관
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- 발행기관명
- 조선대학교 기초과학연구원 [The Natural Science Research Institute of Chosun]
- 설립연도
- 2008
- 분야
- 자연과학>자연과학일반
- 소개
- 본 연구원은 기초과학을 진흥하기 위한 연구·교육 및 그 보급을 목적으로 한다. 이 목적을 달성하기 위하여 다음 각 호의 사업을 수행한다. 1. 기초과학 제 분야에 관한 조사와 연구 2. 기초과학에 관한 학술행사(학술대회, 학술세미나, 심포지엄, 초청강연회 등) 개최 3. 학문후속세대 및 일반인을 위한 기초과학 교육 4. 기관지『조선자연과학논문지』 발간 5. 『자연과학연구총서』, 『자연과학번역총서』 등 단행본 발간 6. 기타 본 연구원의 목적과 관련된 사업
간행물
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- 간행물명
- 통합자연과학논문집(구 조선자연과학논문집) [Journal of Integrative Natural Science]
- 간기
- 계간
- pISSN
- 2005-1042
- 수록기간
- 2008~2026
- 등재여부
- KCI 등재
- 십진분류
- KDC 405 DDC 505
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