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Adiponectin Gene Cloning and Its Expression in Insect Cell Expression System

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  • 발행기관
    한국동물생명공학회(구 한국동물번식학회) 바로가기
  • 간행물
    Reproductive & developmental biology 바로가기
  • 통권
    Volume 36 No 3 (2012.09)바로가기
  • 페이지
    pp.193-198
  • 저자
    In Suh Yuh, Lewis G. Sheffield
  • 언어
    영어(ENG)
  • URL
    https://www.earticle.net/Article/A186505

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원문정보

초록

영어
This study was to examine expression of the recombinant full-length adiponectin (recombinant adiponectin) in insect ovarian cell culture system and to characterize structural properties of the recombinant adiponectin secreted in medium. Gene construct encoding the recombinant adiponectin contained N-terminal collagen-like domain (110 Amino Acids, AAs), C-terminal globular domain (137 AAs) and C-terminal peptides for detection with V5 antibody (26 AAs included adaptor peptide) and purification using the 6xHis tag (6 AAs). The approximate molecular weight of the product (monomer) was 35 kDa. Molecular mass species of the expressed recombinant adiponectin were monomer (～35 kDa), dimer (～70 kDa), trimer (～105 kDa) and hexamer (～210 kDa). The major secreted species were the LMW forms, such as monomer, dimer, and trimer. There was MMW of hexamer as minor form. HMW multimers (～300 kDa) were shown as a tracer or not detected on the SDS-PAGE in several experiments (data not shown). The multimer forms in this study were not compatible to those in animal or human serum and adipose tissue by other researcher’s study in which the major multimer forms were HMW. By protein denaturing experiments with reducing reagent (β- MeOH), anionic detergent (SDS) and heat (95℃) on the SDS-PAGE, not all adiponectin multimers seemed to have disulfide bond linked structure to form multimers. The recombinant adiponectin which expressed in insect ovarian cell culture system seemed to have the limitation as full physiological regulator for the application to animal and human study.

목차

ABSTRACT
 INTRODUCTION
 MATERIALS AND METHODS
  Mouse Fibroblasts Differentiation
  Ooning of the Full-Length Adiponectin:
  Cell Culture and Transfection
  Precipitation of the Recombinant Adiponectin by Polyethylene Glycol (PEG):
  Wheat Germ Agglutination (WGA) Purification
  Ni-NTA Column Chromatography
  Q-Sepharose Column Purification
  Testing for Adiponectin Expression
 RESULTS
 DISCUSSION
 ACKNOWLEDGEMENTS
 REFERENCES

키워드

Recombinant adiponectin Multimer Insect ovarian cell SDS-PAGE

저자

  • In Suh Yuh [ College of Animal Life Sciences, Kangwon National University, Chunchon 200-701. Korea ] Corresponding Author
  • Lewis G. Sheffield [ Department of Dairy Science, University of Wisconsin, Madison, Wisconsin 53706, USA ]

참고문헌

자료제공 : 네이버학술정보

간행물 정보

발행기관

  • 발행기관명
    한국동물생명공학회(구 한국동물번식학회) [The Korean Society of Animal Reproduction and Biotechnology]
  • 설립연도
    1976
  • 분야
    농수해양>축산학
  • 소개
    동물번식생리학, 동물생명공학, 수의학, 인공수정 및 수정란이식을 이용한 동물개량에 관한 이론과 기술의 발전을 통해 학계, 연구계, 산업계 및 양축가 상호간의 협력을 도모함으로써 동물과학발전 및 사회일반의 이익에 기여 한다는 목적을 위해 노력해 나가겠습니다.

간행물

  • 간행물명
    Reproductive & developmental biology
  • 간기
    계간
  • pISSN
    1738-2432
  • eISSN
    2288-0151
  • 수록기간
    1977~2018
  • 십진분류
    KDC 527 DDC 636

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