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특집 : 줄기세포 조직공학 - 연구논문

Tetrameric β-galactosidase를 이용한 고초균 포자에서의 미생물 표면 발현 모체 선별
Screening of Bacterial Surface Display Anchoring Motif Using Tetrameric β-galactosidase in Bacillus subtilis Spore

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  • 발행기관
    한국생물공학회 바로가기
  • 간행물
    KSBB Journal KCI 등재 바로가기
  • 통권
    제26권 제3호 (2011.06)바로가기
  • 페이지
    pp.199-205
  • 저자
    김준형, 반재구, 김병기
  • 언어
    한국어(KOR)
  • URL
    https://www.earticle.net/Article/A159495

※ 원문제공기관과의 협약기간이 종료되어 열람이 제한될 수 있습니다.

원문정보

초록

영어
Using tetrameric β-galactosidase as a model protein, anchoring motives were screened in Bacillus subtilis spore display system. Eleven spore coat proteins were selected considering their expression levels and the location in the spore coat layer. After chromosomal single-copy homologous integration in the amyE site of Bacillus subtilis chromosome, cotE and cotG were chosen as possible spore surface anchoring motives with their higher whole cell β-galactosidase activity. PAGE and Wester blot of extracted fraction of outer layer of purified spore, which express CotE-LacZ or CotG-LacZ fusion verified the existence of exact size of fusion protein and its location in outer coat layer of purified spore. β-galactosidase activity of spore with CotE-LacZ or CotG-LacZ fusion reached its highest value around 16~20 h of culture time in terms of whole cell and purified spore. After intensive spore purification with lysozyme treatment and renografin treatment, spore of BJH135, which expresses CotE-LacZ, retained only 1~2% of its whole cell β- galactosidase activity. Whereas spore of BJH136, which has cotG-lacZ cassette in the chromosome, retained 10~15% of its whole cell β-galactosidase activity, proving minor perturbation of CotG-LacZ, when incorporated in the spore coat layer of Bacillus subtilis compared to CotE-LacZ. Usage of Bacillus subtilis WB700, of which 7 proteases are knocked-out and thereby resulting in 99.7 % decrease in protease activity of the host, did not prevent the proteolytic degradation of spore surface expressed CotG-LacZ fusion protein.

목차

Abstract
 1. 서론
 2. 재료 및 방법
  2.1. 균주 및 배양 조건
  2.2. 유전자 증폭 (PCR amplification)
  2.3. 유전자 조작 (DNA manipulation)
  2.4. 고초균으로의 형질 전환 (Transformation into Bacillus subtilis)
  2.5. 고초균 포자 분리 및 정제 방법 (Purification of Bacillus subtilis spore)
  2.6. β-galactosidase 효소 역가 측정
  2.7. 고초균 포자의 outer coat layer 추출
 3. 결과 및 고찰
  3.1. β-galactosidase 발현벡터 제작 및 고초균 균주의 구축
  3.2. 표면 발현 모체-β-galactosidase 융합 단백질의 β-galactosidase 효소 역가 측정을 통한 최적의 발현 모체 선정
  3.3. PAGE와 Western Blot을 이용한 CotE-LacZ와 CotGLacZ융합 단백질의 표면 발현 확인
  3.4. 고초균 포자위에 표면 발현된 β-galactosidase의 분석
  3.5. 융합 단백질의 포자 표면 발현과 특성에 미치는 다양한 고초균 숙주의 영향
 4. 결론
 감사
 References

키워드

surface display Bacillus subtilis spore β-galactosidase

저자

  • 김준형 [ June-Hyung Kim | 동아대학교 화학공학과 ]
  • 반재구 [ Jae-Gu Pan | 한국생명공학연구원 ]
  • 김병기 [ Byung-Gee Kim | 서울대학교 화학생물공학부 ]

참고문헌

자료제공 : 네이버학술정보

간행물 정보

발행기관

  • 발행기관명
    한국생물공학회 [The Korean Society for Biotechnology and Bioengineering]
  • 설립연도
    1984
  • 분야
    공학>생물공학
  • 소개
    이 법인은 생물 공학의 발전과 보급에 이바지하고, 회원 상호 간의 연구 협력과 친목을 도모함을 목적으로 한다 1. 생물공학 분야의 발전을 위한 연구 협력 2. 생물공학의 실용화를 촉진시키기 위한 산학 협동 3. 학술연구 발표회, 강연회, 연수회 등 학술활동의 개최 4. 국,영문 학술지,소식지,학술회의 Proceedings 및 학술도서의 발간 5. 생물공학 발전을 위한 정책 건의 6. 기타 국제 교류 등 본 학회의 목적 달성을 위한 제반 활동

간행물

  • 간행물명
    KSBB Journal
  • 간기
    격월간
  • pISSN
    1225-7117
  • 수록기간
    2009~2013
  • 십진분류
    KDC 476 DDC 576

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