Earticle

초록

영어

Impaired insulin secretion from pancreatic beta-cells in response to glucose is an important feature in the pathology of non-insulin-dependent diabetes mellitus (NIDDM). In the course of screening for useful insulin secretagogues, we have isolated and identified YHB-2017 (Genistein) as a insulin secretion potentiator from fermentation broths of our in-house microbial library. The insulinotropic activity of YHB-2017 in isolated rat pancreatic islets was exerted only at high
concentration of glucose (8.3-16 mM) but not at low concentration of glucose (3.3-5.5 mM). Also, in perifusion study with isolated rat pancreatic islets, YHB-2017 stimulated insulin secretion in a time-dependent manner when YHB-2017 was added to KRB buffer containing 16 mM glucose. In the presence of 200 μM diazoxide and 35 mM KCl, which stimulates maximum Ca2+ influx independently of KATP channel, YHB-2017 enhanced KATP channel-independent insulin secretion at high concentration glucose (16 mM). To elucidate the mechanisms of the glucose-dependent potentiation effect of YHB-2017, pharmacologic inhibitors for protein kinase A, protein kinase C and calcium/calmodulin kinase II were pre-treated and then the potentiation effect of YHB-2017 on insulin secretion was investigated. Pre-treatment of H89 as a PKA inhibitor had a
significant inhibitory effect on YHB-2017-induced potentiation effect. Furthermore, western immunoblotting analyses revealed that YHB-2017 increased phosphorylation of PKA substrates and cAMP response element-binding protein (CREB) under high concentration of glucose. These results demonstrated that the insulinotropic effect of YHB-2017 is mediated through PKA
signal pathway and activated amplifying KATP channel-independent insulin secretion pathway.

한국어

본 연구에서는 췌장 베타세포의 인슐린 분비 촉진 물질로 선별된 방선균 배양액에서 유래한 YHB-2017 (genistein)의 인슐린 분비 촉진 활성의 특성을 조사하고 그 작용 기전을 밝히고자 하였다. YHB-2017는 췌장소도에서 glucose농도가 16 mM일 때 농도 의존적으로 인슐린 분비를 대조군에 비해 2배 이상 촉진시켰으며, 5.5 mM 이하의 glucose농도에서는 인슐린 분비 촉진 활성이 거의 없는 것으로 나타났다. MIN6 세포를 이용한 YHB-2017의 인슐린 분비 촉진 활성 특성을 분석한 결과, PKA inhibitor (H89)에 의해서 활성이 저해되었으며, 세포막의 KATP channel를 배제하고 단순히 칼슘이온을 최대로 세포내로 유입시킨 조건인 diazoxide (200 μM)와 KCl (35 mM)를 첨가한 경우에 YHB-2017는 인슐린 분비 촉진 활성을 나타내 KATP channelindependent pathway를 통한 인슐린 분비 촉진 기전을 추정할 수 있었다. 베타세포의 단백질 인산화에 대한 영향을 조사한 결과 YHB-2017는 고농도 glucose 조건에서만 PKA 기질과 cAMP response element-binding protein (CREB)의 인산화를 증가시키는 것으로 나타났고, PKC 기질의 인산화에는 영향이 없었다. 또한, YHB-2017를 18시간동안 베타세포에 처리하였으나 인슐린 유전자 발현에는 영향을 주지 않았다. 이상의 결과를 종합하여 볼 때 YHB-2017는 기존의sulphonylurea 계열 약물과는 다른 작용 기전에 의해 췌장 베타세포에서 인슐린 분비를 촉진시키며, 그 기전은 PKA 경로를 통해 amplify 신호를 활성화시키는데 관여하는 것으로 추정된다.

목차

Abstract
 서론
 재료 및 방법
  재료
  세포 배양
  췌장소도 분리
  인슐린 분비 측정
  Sulphonyl urea receptor (SUR) binding 분석
  Western immunoblot 분석
  RNA 분리 및 RT-PCR
  자료분석 및 통계처리
 결과 및 고찰
  Glucose 의존적 인슐린 분비 촉진 활성
  칼슘이온의 영향
  Sulfonylurea receptor (SUR) 결합
  KATP-channel 비의존 인슐린 분비
  Kinase 저해제의 영향
  단백질 인산화 영향
  인슐린 유전자 발현 영향
 요약
 REFERENCES

키워드

저자

• 곽원재 [ Won Jae Kwag | (주)유한양행 중앙연구소 ]
• 박유희 [ You Hoi Park | (주)유한양행 중앙연구소 ]
• 박준철 [ Jun Chul Park | (주)유한양행 중앙연구소 ]
• 이병규 [ Byung Kyu Lee | (주)유한양행 중앙연구소 ]
• 강엽 [ Yup Kang | 아주대학교 의과학연구소 ]
• 최태부 [ Tae Boo Choe | 건국대학교 미생물공학과 ] Corresponding author

참고문헌

발행기관

간행물

표지보기 관심저널 등록

• 간행물명

  KSBB Journal

• 간기

  격월간

• pISSN

  1225-7117

• 수록기간

  2009~2013

• 십진분류

  KDC 476 DDC 576