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초록

영어

LK (lipoprotein kringle) 68’is a polypeptide of a modified ansiostatin consisting of three kringle structures that might be clinically useful as a potential cancer therapeutics. It can be produced by overexpressing it as inclusion body in recombinant E. coli. In this study, solid-phase refolding processes using packed bed adsorption (PBA) and expanded bed adsorption (EBA) column were carried out to compare their refolding yields with that of the conventional, solution-phase refolding process, For the solution-phase and the PBA-mediated processes employing Q-Sepharose, washed inclusion body was used as the starting material, whereas both washed inclusion body and E. coli homogenate were used for the EBA-mediated process employing streamline DEAE. On the final recovery LK68 per unit mass of wet cell basis, the EBA- and PBA-mediated processes showed about 2.7- and 1.5-fold higher yields, respectively, than the solution-phase refolding method. The solid-phase refolded LK68 demonstrated the same Iysine binding bioactivity and the retention time in the RP-and SEC-HPLC as those of the native protein

한국어

재조합 대장균에서 내포체 형태로 발현시킨 LK68을 생물학적 활성을 가진 native한 단백질로 재생시키기 위해서 PBA 크로마토그래피와 EBA 크로마토그래피를 이용한 고체상 재접힘을 수행하였다. 내포체와 세포파쇄액을 시작물질로 하여 재접힘 공정을 수행하였으며 총 단백질 회수율과 재접힘 수율을 비교한 결과, EBA 공정이 기존의 액상 재접힘이나 PBA를 이용한 재접힘 공정에 비하여 우수함을 확인하였다. 또한 Iysine binding, RP-HPLC, SEC-HPLC, Ellman method 등을 사용하여 분석한 결과 재접힘된 LK68이 native LK68와 동등함을 확인하였다. 본 연구를 통해 EBA 크로마토그래피를 이용한 재접힘 방법은 재접힘 단계의 수율을 향상시킬 뿐 아니라 공정 단계, 시간 등을 감소시켜 공정 성능을 전체적으로 향상시킬 수 있음을 제시하였다

목차

서론
 재료 및 방법
  모델 단백질 및 내포체 용해
  PBA-mediated 재접힘 공정
  EBA-mediated 재접힘 공정
  RP-HPLC, SEC-HPLC 분석
  Lysine binding 측정을 통한 재접힘 수율 결정
  Disulfide bond 형성 분석
 결과 및 고찰
  액상 재접힘 공정
  PBA-mediated 재접힘 공정
  EBA-mediated 재접힘 공정
  EBA 공정에서의 세포찌꺼기 응집 현상
 요약
 감사
 REFERENCES

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키워드

저자

• 최원찬 [ Won Chan Choi | 한양대학교 화학공학과 생물공정연구실 ]
• 김민영 [ Min Young Kim | 한양대학교 화학공학과 생물공정연구실 ]
• 서창우 [ Chang Woo Suh | 한양대학교 화학공학과 생물공정연구실 ]
• 이은규 [ Eun Kyu Lee | 한양대학교 화학공학과 생물공정연구실 ] Corresponding Author

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• 간행물명

  KSBB Journal

• 간기

  격월간

• pISSN

  1225-7117

• 수록기간

  2009~2013

• 십진분류

  KDC 476 DDC 576