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초록

영어

Hydrogen sulfide (H2S) is a by-product of metabolism of amino acids including sulfur and alcoholic fermentation, it is generally thought of in terms of a poisonous gas. Though H2S can have a negative impact on the perceived quality of fermented drinks due to an undesirable aroma, it plays prominent roles as a neuromodulator in the mammalian brain as well as a
smooth muscle relaxant. Nowadays studies on the proteins which produce H2S are carried out in various fields such as structure, function, and metabolism. Here we propose to develop a simple and rapid H2S forming assay method, which will lead to speed up preparing the H2S forming proteins for identification by MALDI-TOF MS analysis. We detected three kinds
of proteins which produce H2S in the crude extract of Saccharomyces cerevisiae. Those proteins were cystathionie β-synthase, O-acetylserine sulfhydrylase, and cystathionine γ-lyase.

한국어

생체에서의 황화수소는 의약 분야와 발효 산업에 있어서 중요한 역할을 하고 있다. 본 연구에서는 Saccharomyces cerevisiae을 이용하여 기질인 L-cysteine과 β-mercaptoethanol로 부터 β-replacement 반응에 인한 황화수소를 발생시킬 수 있는 효소를 간편하고 신속하게 동정하는 방법의 확립을 목적으로 하였다. 효소에 의해 발생된 황화수소와 Pb-acetate의 반응으로 생성된 Pb-S를 gel상에서 간편하게 확인한 후, 확인된 단백질들을 이온 교환컬럼를 수행한 후 gel에서 추출하는 방법으로 MALDI-TOF MS의 시료를 간단히 얻을 수 있었다. PMF 방법과 MS/MS ion search 분석을 통해 간편하게 효모에서 황화수소를 형성할 가능성이 있는 세가지 단백질의 동정에 성공하였다. 이 세 가지
단백질은 CYS3, CYS4, MET17 유전자의 단백질로서 cystathionine γ-lyase, CBS, OASS 임이 밝혀졌다. 그리고 이 세 단백질들은 L-cysteine과 β-mercaptoethanol의 존재하에서 황화수소를 실제로 생성함을 확인하였다. 본 연구에서 표적의 물질을 생산하는 단백질들을 젤상에서의 활성측정과 MALDI-TOF MS를 이용하여 간단히 그리고 정확하게 동정하는 방법을 확립하였다.

목차

Abstract
 서론
 재료 및 방법
  실험재료
  균주 및 배양조건
  단백질정량과 H2S 형성 활성측정
  단백질의 정제
  MALDI-TOF MS 분석
 결과 및 고찰
  야생형 효모에서의 황화수소 생성 관련 단백질 확인
  CBS와 OASS 분리정제와 MALDI-TOF MS 분석 시료 준비
  MALDI-TOF MS 분석
 요약
 REFERENCES

키워드

저자

• 조현남 [ Hyun-Nam Cho | 금오공과대학교 자연과학부 응용화학전공 ]
• 판루안 [ Lu-An Fan | 금오공과대학교 자연과학부 응용화학전공 ]
• 유동찬 [ Dong-Chan Yoo | 금오공과대학교 자연과학부 응용화학전공 ]
• 양선아 [ Seun-Ah Yang | 계명대학교 전통미생물자원개발 및 산업화연구센터 ]
• 이인선 [ In-Seon Lee | 계명대학교 전통미생물자원개발 및 산업화연구센터 ]
• 김재형 [ Jae-Hyung Kim | 동일시마즈(주) ]
• 백효현 [ Hyo-Hyun Baek | 동일시마즈(주) ]
• 지광환 [ Kwang-Hwan Jhee | 금오공과대학교 자연과학부 응용화학전공 ] Corresponding author

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• 간행물명

  KSBB Journal

• 간기

  격월간

• pISSN

  1225-7117

• 수록기간

  2009~2013

• 십진분류

  KDC 476 DDC 576