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초록

영어

Heterologous expression of glucose oxidase gene using recombinant yeast has been carried out. Polymerase chain reaction was conducted to obtain the gene encoding glucose oxidase from Aspergillus niger and sequence comparison indicated the cloned 1.9kb DNA fragment appeared to be the glucose oxidise structural gene containing a signal sequence for extracellular location. Transforming shuttle vector was constructed with YEp352 to express the cloned glucose oxidase gene under the control of either GAL1 or GAL10 promoter. Plate assay of recombinant yeasts has shown that GAL1 promoter was more effective in yielding glucose oxidise than GAL10 promoter. Among the five different concentrations of galactose tried, 1% galactose showed the highest induction of glucose oxidase. Cellular localization experiment of recombinant enzyme using spheroplast revealed that most of enzymes (80%) were secreted into culture media in contrast to A. niger. There is no difference in heat-stability of recombinant enzyme up to 50℃ compared to the glucose oxidase from A. niger However, a dramatic reduction of enzyme activity was observed in both enzymes at 60℃.

한국어

재조합 효모를 이용한 포도당산화효소의 대량생산 에 관한 기초연구를 실시하였다. 분비신호를 포함한 포도당산화효소 유전자는 Aspergillus niger로부터 polymerase chain reaction을 이용하여 클로닝한후 G GALl과 GALlO promoter를 이용하여 s. cerevi siae strain 2805에서 말현시킨 결과 GALl promoter를 사용한 형질전환체(yGOD1-l)에서 높은 효율 의 효소생성을 나타냈다. 플라스크 배양 결과 1% galactose를 포함한 YEP 배 지 에셔 최고 6 IU/mL 의 포도당산화효소를 생산하였으며 재조합 포도당산 화효소의 세포내 위치를 비교한 결과 A. niger와는 달리 발현된 효소가 80% 이상 배지로 분비됨을 확인하였다. 재조합 포도당산화효소의 열 안정성을 측정한 결과 표준품과 비교하여 50℃까지 큰 차이를 보이지 않고 높은 활성을 유지하는 것으로 확인되었다.

목차

ABSTRACT
 서론
 재료 및 방법
  사용균주 및 plasmid
  배지 및 배양방법
  Aspergillus niger로부터 포도당산화효소의 클로닝및 특성화
  효모에 재조합 유전자의 도입
  포도당산화효소의 역가 검정
  포도당산화효소의 세포내 localization과 분비효율
 결과 및 고찰
  포도당산화효소 유전자의 클로닝
  포도당산화효소를 생산하는 재조합 효모의 선발
  포도당산화효소 발현에 대한 배지의 영향
  Galactose농도에 딱른 포도당 산화 효소 발현 정도
  포도당산화효소의 세포내 localization과 분비효율
  재조합 포도당산화효소의 물리적 특성
 요약
 감사
 참고문헌

저자

• 전병원 [ Byung-Won Chun | 전북대학교 생물과학부 ]
• 김대혁 [ Dae-Hyuk Kim | 유전공학연구소 ]
• 정봉우 [ Bong-Woo Chung | 전북대학교 화학공학부 ]
• 이현철 [ Hyun-Chul Lee | 전북대학교 화학공학부 ]
• 양문식 [ Moon-Sik Yang | 전북대학교 생물과학부 ] Corresponding Author

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• 간행물명

  KSBB Journal

• 간기

  격월간

• pISSN

  1225-7117

• 수록기간

  2009~2013

• 십진분류

  KDC 476 DDC 576