Earticle

초록

영어

Marine bacterial strain, highly effective agar degrading, was isolated from south sea of Korea and was identified as Pseudomonas sp. This strain was named Halophilic Pseudomonas sp. W7 and accumulated an extracellular agarase which showed a high level of enzyme activity in the presence of agar and agarose. This extracellular agarase was purified by anion-exchange chromatography and gel filtration. Purified agarase showed a single protein band upon sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis and its molecular weight was estimated to be about 89KDa. The agarase gene was cloned into Escherichia coli JM83 using the plasmid vector pUC19. DNA fragments(3.7, 3.0Kb) of Hind III-digested chromosomal DNA of Pseudomonas sp. W7 was inserted into the Hind III site of pUC19. Selected transformants, E. coli JM83/pSWl 000000and E. coli JM83/pSW3, produced agarase and this agarase was accumulated In the cytoplasmic space.

한국어

한국의 남해안에서 한천 분해능이 뛰어난 해양 미 생물을 분리하여 통정한 결과 Pseudomonas 속으로 판명되었으며, 본 연구에서는 이 균을 Halophilic P Pseudomonas sp. W7이라 명영하였다. 이 균주는 호염성 세균으로, 한천의 존재 하에서 높은 효소활성 을 가지는 extracellular agarase를 생산해 내었다. 이 extracellular agarase를 DEAE-Cellulose ani- on exchange chromatography와 gel filtration을 통해 정제하였으며, 정제된 agarase는 SDS-PAGE 를 통해 약 89KDa의 분자량을 지니는 single protein band염을 확인하였다. 한편 agarase의 대량생 산을 위하여 host cell Eo coli JM83과 vector pUC19를 이용하여 gene cloning을 행하였다. Pseudomonas sp. W7의 chromosomal DNA가 삽 입 된 균주 중에 서 agarase activity를 나타내는 E. coli JM83/pSWl과 Eo coli JM83/pSW3를 선멸하 였으며, 전기영통 실험결과 이들은 각각 307Kb, 3.0 K Kb의 chromosomal 단편을 지니고 있음을 확인하였 다. 또한 agarase 유전자가 압입된 변이 균주(B)는 inclusion body 형태의 interacellular agarase를 세포 내에 축적하고 있음이 확인되었다.

목차

ABSTRACT
 서론
 재료 및 방법
  사용 균주 및 배지
  균주의 동정
  배양시간에 따른 균주성장, 효소활성, 점도의 측정
  Enzyme assay
  단백질의 정량
  효소의 정제도 및 분자량 측정
  효소의 정제
  Agarase의 gene cloning
  재조합된 대장균이 생산하는 agarase의 생산여부
 결과 및 고찰
  균주의 동정 및 특성
  균체의 성장과 agarase의 생산에 미치는 배지 조성의 영향
  효소의 분리 ·정제
  Agarase의 gene cloning
 요약
 사사
 참고문헌

저자

• 공재열 [ Jai-Yul Kong | 부산수산대학교 생물공학과 ] Corresponding Author
• 배승권 [ Seoung-Kwon Bae | 부산수산대학교 생물공학과 ]
• 황선희 [ Sun-Hee Hwang | 부산수산대학교 생물공학과 ]
• 하순득 [ Soon-Duck Ha | 동경대학 응용생명화학과 ]
• 김흥태 [ Hung-Tae Kim | 부산수산대학교 생물공학과 ]
• 김성구 [ Sung-Koo Kim | 부산수산대학교 생물공학과 ]
• 김봉조 [ Bong-Jo Kim | 부산수산대학교 생물공학과 ]

참고문헌

발행기관

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• 간행물명

  KSBB Journal

• 간기

  격월간

• pISSN

  1225-7117

• 수록기간

  2009~2013

• 십진분류

  KDC 476 DDC 576