Earticle

초록

영어

A plasmid pTTY2, containing the lipase-producing gene, was used to transform an E. coli phage lysogen, P90c/Φ434, into the lipase-producing lysogen, P90c/Φ434/pTTY2. After the overproduction of lipase by the isopropylthio-B-D-galactoside induction, the prophage Φ434 in the chromosome of the host cell was induced by the milomycin C addition or ultraviolet irradiation to lyse the host cell. The optimum operating conditions, such as the isopropylthio-B-D-galactoside induction period and the phage induction timing, were sought for the efficient cell lysis in the same fermenter. Effective cell lysis occurred at the earlier exponential growth phase with the isopropylthio-B-D-galactoside induction period of 1 hour. The amount of the lipase production was qualitatively measured by the halo size in Luria-Bertani agar medium containing tributyrin and Rhodamine B plate.

한국어

Plasmid pTTY2에 의한 competent cell(P90c/Φ 434)의 형질전환에 의하여 lipase를 생성하는 재조합 대장균(P90c/Φ434/pTTY2)을 합성하였다. Li pase 활성 조사를 위한 LAT plate, Rhodamine B plate를 이용한 실험에서 P90c/Φ434의 경우 halo 형성이 없었고, P90c/Φ434/pTTY2의 경우 용해시 켜 얻은 상등액과 용해되지 않은 미생물을 물리적으 로 깨 서 얻은 상등액 모두 halo를 형성하였다. P90c/434/pTTY2에 대한 IPTG 유도시점, 유도 시간이 434에 의한 미생물 용해에 미치는 영향을 살펴 봄으로써 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 재조합 대장균의 효과적인 용해는 ODGOO 0.5 ~ 2 2.5인 초기 exponential growth phase에서 IPTG 로 유도한 후, mitomycin C 첨가나 uv조사에 의 해 이루어진다. 2. 재조합 대장균의 용해는 IPTG 유도시간이 1 시간일 때 가장 효과적이었으며, 이후 유도시간이 증가할수록 감소하여 유도시간이 4시간일 때는 세포 용해가 이루어지지 않는다. 3. 실험한 범위에서 uv조사보다 mitomycin C 첨가가 세포 용해에 더 효과적이다. 본 연구결과가 대규모의 생물공학 생산물의 정제 에 응용되기 위해서는 고농도 세포에서의 세포용해 에 대한 연구가 펼요한 것으로 판단된다.

목차

ABSTRACT
 서론
 재료 및 방법
  재조합 대장균의 합성
  플라스미드
  배지
  아기로스 젤 전기영동
  Mitomycin C 첨가에 의한 용해
  UV조사에 의한 용해
  Lipase의 활성 측정
 결과 및 고찰
  재조합 대장균의 합성
  Lipase의 활성
  최적 IPTG 유도시기와 phage에 의한 용해시기
 요약
 감사
 참고문헌

저자

• 문윤희 [ Yun-Hee Moon | 인하대학교 공과대학 생물공학과 ]
• 구윤모 [ Yoon-Mo Koo | 인하대학교 공과대학 생물공학과 ] Corresponding Author

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• 간행물명

  KSBB Journal

• 간기

  격월간

• pISSN

  1225-7117

• 수록기간

  2009~2013

• 십진분류

  KDC 476 DDC 576