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초록

영어

Peptides are frequently studied as candidates for new drug development. Recently, synthesized peptide library is screened for a certain functionality on a microarray biochip format. In this study, in order to replace the conventional cellulose membrane with glass for a microarray chip substrate for peptide library screening, we modified the glass surface from amines to thiols and covalently immobilized the peptides. Using trypsin-FITC (fluorescein isothiocyanate) conjugate that could specifically bind to a trypsin binding domain consisting of a 7-amino acid peptide, we checked the degree of surface modification. Because of the relatively lower hydrophilicity and reduced surface roughness, the conjugation reaction to the glass required a longer reaction time and a higher temperature. It took approximately 12 hr for the reaction to be completed. From the fluorescence signal intensity, we could differentiate between the target and the control peptides. This difference was confirmed by a separate experiment using QCM. Furthermore, a smaller volume and higher concentration of a spot showed a higher fluorescence intensity. These data would provide the basic conditions for the development of microarray peptide biochips.

한국어

본 실험에서는 마이크로어레이 형태로 펩타이드와의 공유결합에 의한 고정화를 시키기 위해 유리 칩의 표면을 아민기에서 thiol기로 개질하였다. 펩타이드의 lysine기와 thiol기와의 공유결합반응에는 12시간 정도의 반응시간이 필요하였고 실온보다는 35℃가 유리함을 확인하였다.
Trypsin-FITC와의 반응을 통해 trypsin 결합부위를 가진 target 펩타이드가 control 펩타이드보다 더 높은 형광 신호를 나타냄을 확인하였고, 이를 통해 target 펩타이드를 마이크로어레이 상에서 식별할 수 있었다. 이 trypsin-FITC와의 결합 친화도 차이를 별도의 QCM 실험을 통해서도 확인하였다. 또한 작은 부피의 spot과 높은 농도의 펩타이드 용액이 더욱 높은 표면형광신호를 생성함을 확인하였다.
본 실험을 통해 펩타이드 마이크로어레이 칩 개발을 위한 기초 조건을 확립하였다.

목차

Abstract
 서론
 재료 및 방법
  펩타이드 합성
  유리 칩의 표면 개질
  유리 칩 위의 펩타이드 고정화
  QCM (Quartz Crystal Microbalance)을 이용한 펩타이드 고정화 분석
  펩타이드 고정화에 미치는 spot 부피 및 펩타이드 농도의 영향
 결과 및 고찰
  유리 칩의 표면 개질
  유리 칩을 이용한 펩타이드 고정화
  QCM을 이용한 펩타이드 고정화 연구
  펩타이드 고정화에 미치는 부피 및 농도의 영향
 요약
 REFERENCES

키워드

저자

• 조형민 [ Hyung Min Cho | 한양대학교 바이오나노공학과 생물공정연구실 ]
• 임창환 [ Chang Hwan Lim | 한양대학교 바이오나노공학과 생물공정연구실 ]
• Silke Neff [ Department of Biotechnology, University of Natural Resources and Applied Life Sciences, Vienna, Austria ]
• Alois Jungbauer [ Department of Biotechnology, University of Natural Resources and Applied Life Sciences, Vienna, Austria ]
• 이은규 [ Eun Kyu Lee | 한양대학교 바이오나노공학과 생물공정연구실 ] Corresponding author

참고문헌

발행기관

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• 간행물명

  KSBB Journal

• 간기

  격월간

• pISSN

  1225-7117

• 수록기간

  2009~2013

• 십진분류

  KDC 476 DDC 576