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초록

영어

The process monitoring method for the traditional solution-phase refolding could not be directly applied to the solid-phase refolding of immobilized proteins. In this study, we studied the structural change of the covalently immobilized proteins on the gold film of a SPR (surface plasmon resonance) sensor chip by detecting the reflective index change. After confirming the positive relationship between the resonance value and the protein's degree of unfolding, we tested the effect of denaturant concentration such as urea and guanidine-HCl on the protein structure. To investigate the effect of disulfide bonds on the refolded structure, 2 mM dithiothreitol was added during the in-vitro refolding experiment of urokinase (12 disulfides) and disulfide-free myoglobin. Unlike the myoglobin, the RU (resonance unit) value of the urokinase was not fully recovered to the original value, which suggested that the unrecovered RU value represent the miss-shuffled structure. We proposed the unique method to monitor the unfolding/refolding of
immobilized proteins by using the simple SPR sensor. This method can be applied to identify the optimal condition for the solid-phase refolding process of immobilized proteins.

한국어

고체 상에 고정화된 단백질에 대한 풀림/재접힘 공정을 SPR을 이용하여 정량적으로 모니터링 할 수 있는 방법을 제시하였다. 이러한 방법은 고정화된 단백질의 재접힘 공정의 모니터링을 위한 현재까지 유일한 방법이며 생물학적 활성과 의 비교를 통해 논리적인 근거를 제시하였다. 그러나 이러한 센서칩 상에서 단백질의 풀림과 재접힘을 모니터링 하는 실험에서 풀림 정도에 따른 단백질의 생물학적 활성을 측정한 다는 것이 대부분의 단백질에서는 어려운 문제가 있다. 앞으로 생물학적 활성과 연관된 여러 대상 단백질에서 추가적인 연구가 필요하다. 그러나 본 연구 방법은 빠른 시간에 적은 시료만으로 실험을 수행할 수 있기 때문에 고체상 재접힘(solid-phase refolding) 공정의 최적 조건을 찾는 방법으로 사용할 수 있을 것으로 기대된다.

목차

Abstract
 서론
 재료 및 방법
  시약 및 재료
  센서칩상에 단백질 고정화
  풀림과 재접힘을 위한 변성제 처리
  고정화 단백질의 생물학적 활성 측정
 결과 및 고찰
  센서칩 상에 단백질 고정화
  변성제 농도에 따른 풀림 정도의 정량적 평가
  환원제 처리 후 단백질의 구조변화
  단백질의 풀림 정도와 생물학적 활성과의 상관관계
 요약
 REFERENCES

키워드

저자

• 서창우 [ Chang Woo Suh | 한양대학교 화학공학과 생물공정연구실 ]
• 황상연 [ Sang Youn Hwang | 한양대학교 화학공학과 생물공정연구실 ]
• 박상중 [ Sang Jung Park | 종근당바이오(주) 중앙연구소 발효연구실 ]
• 최강선 [ Gang Sun Choi | 종근당바이오(주) 중앙연구소 발효연구실 ]
• 이은규 [ Eun Kyu Lee | 한양대학교 화학공학과 생물공정연구실 ] Corresponding author

참고문헌

발행기관

간행물

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• 간행물명

  KSBB Journal

• 간기

  격월간

• pISSN

  1225-7117

• 수록기간

  2009~2013

• 십진분류

  KDC 476 DDC 576