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초록

영어

Aspergillus niger LK harboring the enantioselective epoxide hydrolase (EHase) activity was isolated, and enantioselectivity of EHase was tested for various racemic aromatic epoxides. The gene encoding epoxide hydrolase was cloned from cDNA library generated by reverse transcriptase-polymerase chain reaction of the isolated total mRNA. Sequence analysis showed that the cloned gene encodes 398 amino acids with a deduced molecular mass of 44.5 kDa.
Database comparison of the amino acid sequence reveals that it is similar to fungal EHase, whereas the sequence identity with bacterial EHase is very low. Recombinant expression of the cloned EHase in Escherichia coli BL21 yielded an active EHase, which can offer a potential biocatalyst for the production of chiral epoxides.

한국어

Styrene oxide 계열의 라세믹 에폭사이드 기질에 대한 입체 선택적 가수분해능이 우수한 Aspergillus niger계열의 생촉매를 선발하였고, A. niger LK 유래의 EHase의 기질 특이성을 분석하였다. A. niger LK의 EHase는 benzene ring에 oxirane ring이 직접 연결되어 있는 styrene oxide, p-nitrostyrene oxide 기질에 대해서는 (R)-이성질체, benzene ring과 oxirane ring 사이에 ether 등의 연결 chain이 있는 기질에 대해서는 (S)-이 성질체에 대한 입체선택적 가수분해능이 우수하였다. A.niger LK의 EHase 유전자를 RT-PCR 방법으로 클로닝하였고, sequencing을 통해 다른 미생물 유래의 EHase와의 sequence identity 분석 등을 통해 특성을 분석하였다. Yeast 유래의 EHase와는 32% 수준의 sequence identity를 보였으며, Agrobacterium, Corynebacterium 등의 박테리아 유래 EHase와
는 identity가 매우 낮은 특성을 보였다. E. coli 숙주에서 발현된 재조합 EHase의 활성은 라세믹 에폭사이드 기질에 대한 입체선택적 가수분해 반응을 통해 확인할 수 있었다. 클로닝된 EHase의 보다 효율적인 발현 연구가 필요하며, 이러한 재조합 EHase는 고부가가치 광학활성 에폭사이드 제조를 위한 생물전환공정 시스템의 생촉매로 응용될 수 있을 것으로 기대된다.

목차

Abstract
 서론
 재료 및 방법
  균주 배양 및 생촉매 제조 조건
  입체선택적 가수분해 및 가스크로마토그라피(GC) 분석
  Total RNA 분리 및 cDNA 합성
  PCR을 통한 EHase 유전자의 증폭 및 클로닝
  재조합 EHase의 발현 및 분석
 결과 및 고찰
  A. niger LK 생촉매 특성 분석
  EHase 유전자 클로닝 및 특성 분석
  EHase 발현시스템 개발
 요약
 REFERENCES

키워드

저자

• 이은영 [ Eun Yeol Lee | 경성대학교 공과대학 식품공학과 ] Corresponding author
• 김희숙 [ Hee-Suk Kim | 경성대학교 공과대학 식품공학과 ]

참고문헌

발행기관

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• 간행물명

  KSBB Journal

• 간기

  격월간

• pISSN

  1225-7117

• 수록기간

  2009~2013

• 십진분류

  KDC 476 DDC 576