Earticle

초록

영어

Several culture systems including batch, two-stage CSTR, semi-fed batch, and two-stage cyclic fed-batch were investigated for the efficient production of the Fab fraction of PDC-E2 specific human monoclonal antibody using high cell density recombinant E. coli. A two-phase batch system and a two-stage continuous system were examined to overcome plasmid instability problems, by separating the growth and the production stages. The cell density and
productivity of the two-stage continuous culture was better than that of the two-phase batch fermentation. In the two-stage continuous culture system with DO-stat, the cell growth and the productivity were superior to those of the system without the DO control. Also, almost total plasmid stability was maintained in the two-stage continuous culture system. Modified M9 medium was selected as an optimum feeding medium for the fed-batch process, and the optimum C/N ratio determined to be 2:3. The optimum feeding rate was 0.6 g/ℓ/hr for a constant feeding strategy in semi-fed batch system. When the feeding medium was fed by pulsing, it was observed that more frequent pulsing resulted in improved cell growth. The linear feeding method was the most efficient of the various feeding methods tested. Finally, high cell density culture using a two-stage cyclic fed batch system with pH-stat was tried because the linear feeding
method showed limitations in terms of obtaining high cell densities, and a cell density of 54 g/ℓ was achieved. It was concluded that the two-stage cyclic fed batch system was the most efficient system for high cell density culture of the systems tested. However, productivity improvements were lower than expected due to the extremely high accumulations of acetate, although the low levels of residual glucose were maintained.

한국어

고농도 유전자 재조합 대장균을 이용하여 pyruvate dehydrogenase dehydrogenase complex-E2 특이성 인간 모노클론 항체의 Fab 부분을 효율적으로 생산하기 위해 회분식, 이단 연속식, 반 유가식, two-stage cyclic fed-batch 등 여러 가지 배양 방법이 조사되었다. 먼저 플라스미드 안정성 문제를 극복하기 위해 growth stage와 production stage를 분리하는 two-phase 회분식 배양과 이단 연속식 시스템을 시도하였다. 그 결과 two-phase 회분식 배양보다는 이단 연속식 배양에서의 세포농도와 항체
생산성이 우수하였다. 또한 이단 연속식 배양에서의 세포 성장과 항체 생산성은 용존산소를 제어한 경우가 그렇지 않은 경우보다 월등하게 높았다. 그리고 plasmid 안정성에 있어서 는 실험기간 내에 거의 100%를 유지하여 높은 안정도를 보여주었다. 유가식 공정에 적합한 공급 배지로 변형된 M9 배지가 최적배지로 선정되었고 이 배지 중 최적의 C/N 비율을 조사한 결과 2:3으로 결정되었다. 반 유가식 시스템에서 constant feeding 전략을 사용할 경우 최적 공급속도는 0.6 g/ℓ/hr이었다. 또한 pulse에 의해 공급배지를 공급할 경우에는 총 공급량이 같을 경우 소량으로 자주 공급해 주는 것이 공급배지를 한꺼번에 많은 양을 공급해주는 것 보다 바람직하였다. 여러 가지 feeding 전략을 조사해 본 결과 linear feeding 방법이 가장 효과적이었다. 하지만 linear feeding 방법마저도 고농도 세포배양에 한계가 있었기 때문에 pH-stat 방법을 이용한 two-stage cyclic fed-batch 시스템을 시도하여 54 g/ℓ의 세포
를 얻을 수 있었다. 따라서 이 방법이 일단 생산성 향상을 위한 세포의 고농도 배양에는 조사한 여러 배양 시스템 중에 가장 효율적인 시스템임을 알 수 있었다. 하지만 이 시스템에서 포도당을 낮은 level로 유지할 수 있었으나, 초산의 과도한 축적으로 항체 생산성의 향상은 예상에 비해 크지 않았다.

목차

Abstract
 서론
 재료 및 방법
  사용균주
  기본 배양조건
  분석
  Plasmid 안정성 분석
  Two-phase 회분식 배양과 two-stage 연속식 배양
  여러 가지 nutrient feeding 방법을 적용한 semi-fedbatch 배양
  Two-stage cyclic fed-batch 배양
 결과 및 고찰
  Two-phase 회분식 배양
  Two-stage 연속식 배양
  Semi-fed batch system을 위한 공급배지 성분
  Constant feeding 방법을 이용한 semi-fed batch fermentation
  Linear feeding 방법을 이용한 semi-fed batch fermentation
  고농도 세포배양을 위한 two-stage cyclic fed-batch system
 요약
 REFERENCES

키워드

저자

• 이미숙 [ Mi-Sook Lee | 강원대학교 식품생명공학부 ]
• 전주미 [ Joo-Mi Chun | 강원대학교 식품생명공학부 ]
• 차상훈 [ Sang-Hoon Cha | 강원대학교 식품생명공학부 ]
• 정연호 [ Yeon-Ho Jeong | 강원대학교 식품생명공학부 ] Corresponding author

참고문헌

발행기관

간행물

표지보기 관심저널 등록

• 간행물명

  KSBB Journal

• 간기

  격월간

• pISSN

  1225-7117

• 수록기간

  2009~2013

• 십진분류

  KDC 476 DDC 576